新型CD20核酸适配体的筛选及鉴定.pdf

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1、2014年5月基础医学与临床Mav2014第34卷第5期Basic＆ClinicalMedicineVo1．34No．5文章编号：1001-6325(2014)05-0628—05研究论文新型CD20核酸适配体的筛选及鉴定张李钰’，胡燕，曹蓓蓓，段金虹，刘枯，杨先达(1．中国医学科学院基础医学研究所病理生理系，北京100005；2．北京协和医学院北京协和医院临床遗传学实验室，北京100005)摘要：目的研发能特异性识别CD20分子的DNA适配体，使其作为肿瘤靶向分子为非霍奇金淋巴瘤的新型靶向治疗提供依据。方法体外合成含有21个随机寡核苷酸、全长为5

2、9个碱基的DNA文库，以CD20胞外表位肽为靶标，利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)，从文库中筛选CD20适配体；利用流式细胞术评估适配体的富集程度、适配休与CD20多肽，适配体与CD20阳性细胞的结合特性；用MFold软件预测适体预计结构。结果经多轮筛选获得了能识别CD20结构的全新DNA适配体CFA一1；它能特异性地识别CD20『；}{性淋巴瘤细胞，与“蛋白及CD20阴性细胞的结合较弱，与经胰蛋白酶处理的CD20阳性细胞的结合也减弱。结论该新刑适配体能选择性识别CD20结构及CD20阳性细胞，在CD20阳性淋巴瘤的靶向诊疗方面具有应用

3、潜能。关键词：适配体；SEtEX；CD20中图分类号：R733．7文献标志码：ASelectionandidentificationofanovelDNAaptameragainstCD20moleculeZHANGLi—yu，HUYan，CAOBei．bei，DUANJin．hong，LIUZhe，YANGXian—da’(1．Dept．ofPhysiologyandPathophsiology，InstituteofBasicMedicalSciences，CAMS＆PUMC，Beijing100005；2．LaboratoryofClinic

4、alGenetics，PekingUnionMedicalCollegeHospital，CAMS&PUMC，Beijing100005，China)Abstract：ObjectiveTodevelopaCD20aptamerthatmaypotentiallyserveasatumor—homingligandfortargetedtherapyagainstnon—Hodgkin’Slymphoma(NHL)．MethodsAsingle—stranded59ntDNAlibrarycontaining21ntrandomo1ig0nucle

5、otideswassynthesized．AnewCD20aptamertermedCE4—1wasdevelopedwithSELEXtech—nique，usingaCD20epitopeasthetarget．FlowcytometrywasperformedtomonitortheenrichmentoftheselectedDNApool，andthebindingpropertiesofCE4—1towardsCD20structureandCD20一positivecells．ThestructureofCE4—1waspredict

6、edbyMFoldsoftware．ResultsTheDNAaptamerCE4—1couldselectivelybindwithCD20structureandCD20一positivecells，withminimalcrossreactivitytoBSAandCD20一negativecells．Additionally，trypsintreatmentgreatlyreducedthebindingofCE4—1toCD20一positivecells．ConclusionsAnovelCD20aptamerCE4—1mayrecog

7、nizeCD20structureandCD20一positivecellsselectively，whichmayhaveapplicationpotentialsintargetedtherapyagainsttheCD20一positivetumors．Keywords：aptamer；SELEX；CD20收稿日期：2013—12—26修回日期：2014—03—12基金项目：科技部重大科学计划(2011CB933504)通信作者(correspondingauthor)：ayangmd@gmail．con张李钰新型CD20核酸适配体的筛选及鉴

8、定629非霍奇金淋巴瘤(non—Hodgkin’Slymphoma，1．3SELEX过程NHL)是最常见的淋巴系统恶性肿瘤