胃癌细胞核酸适体的筛选和鉴定

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1、隶．轫大◆嘤临床医学硕士学位论文硕士学位论文胃癌细胞核酸适体的筛选和鉴定研究生姓名：主整导师姓名：萱红勇SelectionandAnalysisofAptamersagainstHumanGastricCarcinomaCellsAThesisSubmittedtoSoumeastUni、：，ers时FortlleAcademicDegreeofMasterofMedicineBYLINGJieSupervisedbyPro￡CAOHong—yongSchoolofMedicineSoutheastUniVersityMay2012东南大学学位论文

2、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：：玺垒日期：鬯竺堕r东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致

3、。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：￡垒垒导师签名：日期：刎沪。卜ff、中文摘要胃癌细胞核酸适体的筛选和鉴定研究生：凌杰导师：曹红勇教授东南大学研究目的：核酸适体是能够特异性结合靶细胞及相关分子的单链寡核苷酸片段，不仅有分子识别功能，还可能有信号转导和调节功能，已被作为分子识别工具和治疗药物的载体用于多种疾病的诊断和治疗，其在胃癌诊断和治疗中的意义未见研究报道。本研究通过细胞．SELEx技术筛选胃癌细胞特异性核酸适体，并对其特异性和敏

4、感性进行初步鉴定，为建立以核酸适体为基础的胃癌诊疗技术奠定基础。研究方法：(1)设计合成随机单链DNA文库；(2)以人胃癌细胞为靶标、以人正常胃上皮细胞为参照，采用消减细胞SELEX技术，从随机单链DNA文库中筛选胃癌细胞结合核酸适体；(3)对筛选所得核酸适体进行克隆、测序和二级结构分析；(4)将二级结构各异的适体进行合成并标记FITC荧光基团，分别与胃癌细胞、正常胃上皮细胞、肝癌细胞及结肠癌细胞结合，流式细胞仪分析其识别和结合胃癌细胞的特异性和敏感性。结果：(1)经过1．7轮筛选，每轮次级文库与胃癌细胞结合率逐渐升高，于第7轮时达到平台区(69．

5、16％)；(2)经克隆测序鉴定出30条长度和两端固定序列区序列符合设计要求、中间随机序列区序列各异的胃癌适体，分别命名为cy．印t1-30；(3)二级结构分析显示30条胃癌适体多为茎环、发夹及两者组合体样结构：(4)流式细胞仪分析示cy．aptl．30．FITC结合胃癌细胞的率高于其他细胞，其中cy-叩t2、cy-apt8、cy-叩t19和cy-apt20识别和结合胃癌细胞的特异性和敏感性较强，分别为60．7％、63．6％、61．9％、67．7％。结论：通过消减细胞SELEX技术所筛选出的胃癌结合核酸适体，能够识别和结合胃癌细胞，具有较强的特异性和

6、敏感性，有望作为分子识别工具和治疗药物的载体，用于胃癌的诊断和治疗。关键词：核酸适体；细胞SELEX；胃癌细胞；流式细胞分析东南大学硕．J：学位论文SelectionandAnalysisofAptamersagainstHumanGastricCarcinomaCellsGraduatestudent：LingJie；Tutor：ProfCAOHon争yongSoumeastUniVersityABSTRACTobjectiVes：NucleicacidaptaJ_nersaresin91estrandedoligonucleotide{’rag

7、mentsthatspecificallyrecognizeandbindtota唱etcellsa11drelatedm01ecules．Aptalllersalrenowusedast001sf’ormolecularrecognitionanddrugsdeliVeryfbrdiagnosisand仃ea饷entofdiseasesduetotheir凡nctjonalr01esinmolecularrecognition，si铲altransductionandregulation。HoweVer，theusefulnessofaptame

8、rsinthediagnosisajldtreatmentofhu_lnangastriccancerremainstob