核酸适体筛选技术最新研究情况综述

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1、精选公文范文管理资料核酸适体筛选技术最新研究情况综述　　1990年，Ellington等[1]和Tuerk等[2]创建了一种能制备高特异性、高亲和力结合靶分子的寡核苷酸技术，称为指数富集的配体系统进化（systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment,SELEX）技术。用这种技术制备的寡核苷酸分子称为适体（aptamer），一般由几十个核苷酸组成，可以是RNA或单链DNA.理论上几乎所有自然界中存在的靶分子均可通过SELEX技术筛选得到相应的适体。20多年来，核酸适体作为新型的仿生识别元素，在疾病诊断治疗、药物筛选、分子识别、分析检

2、测等众多领域得到了广泛的应用，国内外众多科学工作者通过SELEX技术筛选得到了多种靶分子的适体，核酸适体筛选技术本身也得到了不断地完善和发展。　　1SELEX[键入文字][键入文字][键入文字]精选公文范文管理资料技术的原理及流程　　　　SELEX技术是体外筛选核酸适体的基本方法，是一种以组合化学技术、PCR技术以及基因克隆测序技术等为基础的现代分子进化工程技术，该技术的操作流程类似于达尔文的生物进化论中所包含的3个过程：自发突变、自然选择和大量增殖[3].采用SELEX技术筛选适体包括以下几个基本步骤：①人工合成随机的寡核苷酸序列文库，文库的容量一般在1014~1018之间，文库中随

3、机寡核苷酸序列一般为20~60个碱基文库；②在特定的筛选缓冲体系中将寡核苷酸库与靶分子孵育；③用离心法、柱层析法、膜过滤法、毛细管电泳法、磁珠法等特定的方法，将与靶分子结合的寡核苷酸序列从体系中分离；④对分离的特异性结合的核酸序列进行PCR扩增；⑤将PCR扩增获得双链DNA利用磁珠法、核酸外切酶法、变性高效液相色谱法拆分获得次级的寡核苷酸库；⑥重复②~⑤[键入文字][键入文字][键入文字]精选公文范文管理资料步，随着筛选轮数的不断增加，文库里亲和力低的寡核苷酸序列被逐渐淘汰，对最终筛选到的寡核苷酸序列进行克隆测序，并对寡核苷酸序列与相应的靶分子结合的特异性和亲和力进行鉴定和检测[4].

4、　　2核酸适体的筛选方法　　　　将分子进化的过程在体外进行是SELEX技术最大的特点，但在适体筛选的实际过程中，往往会受到筛选环境以及SELEX技术本身的限制，影响到筛选效率和效果。近年来，在传统SELEX技术的基础上，新的SELEX技术不断涌现，这些新的技术在不断完善SELEX技术的同时，也极大地推动了适体技术在生物医学、药物筛选、靶向治疗、农药检测[5]、环境监测、食品安全等领域中的发展和应用。　　2.1毛细管电泳SELEX（capillaryelectrophoresisSELEX,CE-SELEX）技术　　　　如何将与靶分子结合的寡核苷酸从体系中分离出来，是限制传统SELEX技

5、术发展的一个瓶颈。2004年，Mendonsa[键入文字][键入文字][键入文字]精选公文范文管理资料等[6]根据核酸适体与靶分子结合后使靶分子原有的质量和构象发生改变并导致其电泳行为变化的特性，运用毛细管电泳技术将靶分子结合的核酸与游离的核酸进行了有效的分离。2005年，Drabovich等[7]利用CE-SELEX技术，仅用3轮筛选就获得了能特异性结合Muts蛋白的适体。Tang等[8]对毛细管电泳法与亲和层析法筛选蓖麻毒素的适体的结果进行比较，亲和层析法在第9轮筛选后结合率仅为38.5%,而毛细管电泳法在第2轮筛选后结合率已达60.2%,经过4轮筛选后结合率高达87.2%,整个实

6、验在2周之内完成。CE-SELEX技术最大的优点就是显着提高了筛选效率，一般仅需2~4轮筛选即可获得所需适体[4].利用毛细管电泳的微量流体技术使得筛选效率大大提高，尤其适用于常规筛选不易获得的极少量靶物质的适体[9].徐华等[10]以表达有绿色荧光蛋白的HepG2细胞作为靶细胞，利用CE-SELEX技术仅经过1轮筛选就获得了较好的效果。Krylov等[11]将动力学方法与毛细管电泳结合，创建了平衡混合物非平衡毛细管电泳（non-equilibriumcapillaryelectrophoresisofequilibrium[键入文字][键入文字][键入文字]精选公文范文管理资料mix

7、tures,NECEEM）技术。Berezovski等[12]利用NECEEM技术，仅用了1轮筛选就获得了亲和力为1nmol/L的法呢基转移酶（farnesyltransferase,FTase）适体。Yang等[13]利用CE-SELEX技术，仅用了3轮筛选就获得了NMM（N-methylmesoporphyrin）的适体。Tran等[14]利用这种方法，经过8轮筛选成功获得了花生过敏原之一的阿糖胞苷H1的适体。CE-SELEX技术的主要缺陷