五味子乙素干预顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡与自噬的研究

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1、分类号：R2-031学校代码：10062密级：学号：2012602479硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：五味子乙素干预顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡与自噬的研究TITLESchisandrinBprotectsthetubularapoptoticandautophagyofcisplatinnephrotoxicity一级学科：中西医结合二级学科：中西医结合临床论文作者：吴银娜指导教师：张勉之教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R2-031学校代码：10062密级：学号：2012602479

2、学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：五味子乙素干预顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡与自噬的研究TITLESchisandrinBprotectsthetubularapoptoticandautophagyofcisplatinnephrotoxicity一级学科：中西医结合二级学科：中西医结合临床论文作者：吴银娜指导教师：张勉之教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了

3、文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方

4、框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：观察中药五味子的活性成分五味子乙素(schisandrinB，SchB)对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum(II),Cisplatin,CDDP)诱导的肾小管上皮细胞凋亡与自噬的影响，并探讨其作用机制。方法：体内实验-雄性BALB/c小鼠25只，随机分为5组：对照组、CDDP模型组、低剂量SchB预保护组(20mg/kg)，高剂量SchB预保护组(100mg/kg)、单纯SchB组(100mg/kg)，每组各5只。高、低剂

5、量SchB预保护组与单纯SchB组将SchB溶于橄榄油灌胃(20mg/kg，100mg/kg)，对照组与CDDP模型组灌胃同等体积橄榄油，共持续5天。在实验第三天CDDP模型组与高、低剂量SchB预保护组单次腹腔注射CDDP(20mg/kg)造成小鼠急性肾损伤，对照组与单纯SchB组腹腔注射同等剂量的生理盐水。实验结束后小鼠内眦静脉取血测定血肌酐(Scr)含量；光学显微镜下观察H&E染色肾组织形态变化；TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡；免疫组化方法检测肾组织中p53蛋白的表达；WesternBlot检测肾组织凋亡相关蛋白p53及

6、自噬相关蛋白LC3的表达水平。体外实验-加入含SchB的培养基预先作用于HK-2细胞2h，再加入顺铂作用24h，造成HK-2细胞损伤。设对照组、CDDP模型组(50μmol/L)、低剂量SchB预保护组(1μmol/LSchB，50μmol/LCDDP)、高剂量SchB预保护组（10μmol/LSchB，50μmol/LCDDP）、单纯SchB组（10μmol/LSchB）。CCK-8试剂盒检测各组细胞活性；流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡；WesternBlot检测各组凋亡相关蛋白p53及自噬相关蛋白LC3的表达水平。结果：体内实

7、验-CDDP模型组与对照组相比血肌酐升高；HE染色显示肾小管上皮细胞出现融合、空泡变性、蛋白管型，肾小管腔萎缩或扩张等病理表现，肾小管损伤评分显著增高；TUNEL法检测显示肾小管上皮细胞凋亡增多；免疫组化发现p53蛋白表达水平明显减少，WesternBlot检测显示p53及LC3的表达水平均明显减少。SchB预保护组与CDDP模型组比较，血肌酐降低；H&E染色病理表现轻微，肾小管损伤评分降低；肾小管细胞凋亡减少，p53及LC3蛋白表达水平增多，均有统计学意义。体外实验-CDDP模型组与对照组相比细胞活性降低；细胞凋亡增多；p53及

8、LC3蛋白表达水平减少。SchB预保护组与CDDP模型组相比细胞活性增高；细胞凋亡减少；p53及LC3蛋白表达水平增高，均有统计学意义。上述体内及体外实验中单纯SchB组与对照组比较均无明显差异。I结论：在体内，单次腹腔注射CDDP(20mg/kg