gpr50通过调控notch和wntβ-catenin信号通路促进神经前体细胞的自我更新与神经元分化

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目GPR50通过调控Notch和Wnt/p-catenin信号通路促进神经前体细胞的自我更新与神经元分化研究生姓名马艳霞指导教师姓名马&红专业名称神经&物学研究方向神经干细胞的增殖与分化2015年4月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文

2、中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：S曰期：io/io^n苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论

3、文属在年_月解密后适用本规定。非涉密论文0论文作者签名：筠棒日期：Z0[S.^.^导师签名:期：勝心力GPR50通过调控Notch和Wnt/β-catenin信号通路促进神经前体细胞的自我更新与神经元分化中文摘要中文摘要目的：在中枢神经系统，神经前体细胞是一种多潜能细胞，他能够自我更新，同时也能分化形成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞。神经前体细胞增殖、分化、迁移并最终形成神经网络。上述任何一个过程的异常都会引起大脑的机能紊乱，并导致一些神经系统的疾病，如精神分裂症、自闭症和阿尔茨海默症。最近的研究表明，在严重的抑郁症和双极情感障碍的患者中，神经前体

4、细胞的增殖和分化出现异常，这表明，神经前体细胞在抑郁症和双极情感障碍患者的致病机理中发挥一定的作用。G蛋白偶联受体50(GPR50)，亦叫褪黑激素相关受体或ML1X，是位于X染色体上的G蛋白偶联受体。有研究表明，GPR50是重度抑郁症和双极情感障碍的一个风险基因。有研究也表明，抑郁症和双极情感障碍可能与大脑皮层的发育异常相关，在成年哺乳动物的脑垂体、下丘脑、海马中，GPR50有表达。此外，GPR50在胚胎13天的小鼠大脑中开始表达，在胚胎18天时表达量达到最高峰。这一系列的证据表明，GPR50在大脑的发育中可能起着很重要的作用。但是，关于GPR50在大

5、脑中的功能和机制仍不清楚，所以我们主要探索GPR50对神经前体细胞的自我更新及分化的影响和分子机制。方法：我们利用免疫荧光染色的方法，检测GPR50在分离的神经前体细胞和胚胎14天的小鼠大脑VZ区神经前体细胞上的表达。分离胚胎发育14天的小鼠侧脑室室管膜下区的神经前体细胞，用含B27、EGF、bFGF的DMEM/F12的培养液培养3-4天，用细胞核电穿孔技术转染GPR50的siRNA，每个电转杯转染siRNA200nM，然后将细胞按每孔500个细胞的密度种于96孔细胞培养板中培养8天，检测形成的神经球数目，按2x104的密度在24孔培养板中培养8天检测

6、形成神经球的大小。用含B27和0.5%的胎牛血清的DMEM/F12分化培养液培养5天，然后分析神经前体细胞分化为星型胶质细胞的情况。在分子机制方面，通过实时定量PCR（q-PCR）和荧光素酶报告基因的方法，在转录水平上检测与神经前体细胞增殖和分化相关的一些基因的表达。结果：1）GPR50在VZ区和离体培养的神经前体细胞上表达。I中文摘要GPR50通过调控Notch和Wnt/β-catenin信号通路促进神经前体细胞的自我更新与神经元分化2）用siRNA干扰GPR50后，神经前体细胞的自我更新能力减弱。3）用siRNA干扰GPR50后，对星型胶质细胞的分

7、化没有影响。4）用siRNA干扰GPR50后，Hes1的表达水平升高，而TCF7L2，Ngn1，Ngn2和cyclinD1的表达水平降低。结论：GPR50在VZ区和离体培养的神经前体细胞上表达。GPR50能促进神经前体细胞的自我更新，但是对星型胶质细胞的分化没有影响。GPR50可能是通过Notch信号通路和wnt/β-catenin信号通路来共同上调cyclinD1的表达，从而促进神经前体细胞自我更新；并且，通过上调Ngn1和Ngn2的表达来促进神经前体细胞向神经元的分化。关键词：GPR50；神经前体细胞；自我更新；分化；Notch；Wnt/β-cat

8、enin作者：马艳霞指导老师：马全红教授IIGPR50通过调控Notch和Wnt/β-cate