notch信号对视网膜前体细胞分化的作用

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1、中南大学学报(医学版)2009,34(6)http://xbyx.xysm.net492JCentSouthUniv(MedSci)Notch信号对视网膜前体细胞分化的作用1211211张锟,卢光,高玲,唐罗生,王建,王涛,胡蓉(中南大学1.湘雅二医院眼科,长沙410011;2.生殖与干细胞工程研究所,长沙410078)[摘要]目的:观察Notch信号对体外培养的SD大鼠视网膜前体细胞分化的影响。方法:从胎龄16d的SD大鼠分离视网膜神经上皮,采用悬浮法培养视网膜前体细胞。实验分Notch信号抑制组和对照组两组。第14天行免疫细胞化学法分析细胞类型、Notch信号的表达

2、及变化。结果:视网膜前体细胞大部分表达Notch1胞内段及其下游转录因子Hes1,少量细胞表达bHLH转录因子NeuroD和Mash1;自发分化后大量细胞表达bHLH转录因子NeuroD和Mash1,少量细胞表达Notch1胞内段和Hes1。Notch信号抑制组Nestin,GFAP阳性率显著低于对照组,βtubulin阳性率显著高于对照组,而Recoverin阳性率与对照组差异无统计学意义。结论:Notch1信号在体外可能参与了对视网膜前体细胞分化的抑制,抑制Notch信号可部分促进视网膜前体细胞向神经元分化,同时抑制了神经胶质细胞的分化。[关键词]前体细胞;视网膜;

3、Notch;bHLH[中图分类号]Q254;R774[文献标识码]A[文章编号]16727347(2009)06049206RoleofNotchsignalingindifferentiationofretinalprogenitorcells1211ZHANGKun,LUGuangxiu,GAOLing,TANGLuosheng,211WANGJian,WANGTao,HURong(1.DepartmentofOphthalmology,SecondXiangyaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha410011;2.I

4、nstituteofReproductionandStemCellEngineering,CentralSouthUniversity,Changsha410078,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheroleofNotchsignalingindifferentiationofSpragueDawley(SD)ratretinalprogenitorcells(RPCs).MethodsRPCswereisolatedfrom16dayembryonicSDratsandculturedinsuspension.RPCs

5、wereculturedrespectivelyinmediawith(treatmentgroup)orwithout(controlgroup)γsecretaseinhibitorXwhichwasusedtoblockNotchsignaling.Morphologicalobservationandimmunocytochemistrywereappliedatday14todeterminethecelltypesandanalyzetheexpressionofNotchpathwaygenesinbothgroups.ResultsMostRPCsexp

6、ressedNotch1intracellulardomainsoritsdownstreamtranscriptionalfactorHes1.AfewexpressedbHLHtranscriptionalfactorsNeuroDandMash1.MostautodifferentiatedRPCsexpressedNeuroDorMash1,whileafewofthemexpressedNotch1intracellulardomainsorHes1.InthegrouptreatedwithγsecretaseinhibitorX,thepositiver

7、ateofNestinorGFAPwasmuchlowerthanthatinthecontrolgroupwhilethepositiverateofβtubulinwasmuchhigherthanthatinthecontrolgroup.ThedifferenceinthepositiverateofRecoverinbetweenthetwogroupswasnotsignificant.ConclusionInvitroNotchsignalingmayinhibitretinalstemcellsdiffere

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