电刺激促进大鼠视网膜前体细胞增殖分化的初步实验研究

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1、万方数据复旦大学硕士学位论文电刺激促进大鼠视网膜前体细胞增殖分化的初步实验研究硕士研究生:郭婷婷硕士生导师:莫晓芬研究员复旦大学附属眼耳鼻喉科医院2013年4月万方数据缩写英文名称TESESBrdUCMZDAPIBDNFbFGFGadd45GSPBS中英文缩写一览表transcornealelectricalstimulationelectricalstimulationbromodeoxvuridineciliarymarginzone4’6一diamidino一2一phenylindolebrainderivedneurotrophicfacto

2、rbasic——fibroblastgrowthfactorgrowtharrestandDNAdamageglutaminesynthetasephosphatebuffersolution中文名称跨角膜电刺激电刺激溴脱氧尿苷睫状体边缘带4’6---脒基一2一苯基吲哚脑源性神经营养因子碱性成纤维细胞生长因子生长阻滞和DNA损伤修复谷氨酰胺合成酶磷酸盐缓冲液万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯6日U舌..⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯O正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分经角膜低电流刺激促进成年大鼠视网膜睫状体边缘带细胞增殖分化作用的实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.8实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯.18第二部分低电流刺激促进大鼠视网膜Moiler细胞分泌神经营养因子作

4、用的评估⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..19材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯..27实验总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42万方数据硕士

5、学位论文电刺激促进视网膜前体细胞增殖分化的初步研究电刺激促进大鼠视网膜前体细胞增殖分化的实验研究摘要青光眼、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、视网膜脱离等疾病可以造成视网膜神经元不同程度的凋亡,最终导致不可逆性视力损害。目前临床上尚无根治这类疾病的有效方法,神经保护药物或神经营养因子补充等方法只是着眼于保护未凋亡的神经元,对于已经受损的视网膜神经元却无能为力;干细胞的应用则是立足于施救已受损的神经元,可在一定程度上逆转疾病的进程,但干细胞移植治疗仍需面临移植细胞的免疫排斥、供体来源以及与宿主视网膜的有效整合等诸多问题。因此,如何原位诱导自体内源性

6、视网膜前体细胞增殖、分化备受研究者的关注。目前的研究证明,睫状体边缘带细胞、虹膜色素上皮细胞、Muller细胞都可能作为成年哺乳动物的视网膜干细胞来源,其中以睫状体边缘带细胞、MUllet细胞来源的视网膜干细胞最为重要,常常被称为视网膜前体细胞。电刺激(electricalstimulation,ES)在一些动物模型和临床研究中都初步显示了良好的促细胞增殖分化效果,且副作用小,引起了眼科学者们的关注。本研究旨在探讨电刺激对睫状体边缘带细胞、Muller细胞来源的视网膜前体细胞增殖分化的影响,并对电刺激后即早基因Gadd45B在视网膜前体细胞增殖分化过

7、程中的表达调控作用进行研究和探索。第一部分跨角膜电刺激促进成年大鼠睫状体边缘带视网膜前体细胞增殖分化目的旨在探讨跨角膜电刺激促进成年大鼠睫状体边缘带视网膜前体细胞增殖分化。方法成年雌性sD大鼠予以每日腹腔注射BrdU(100mg/kg),连续腹腔注射5天用于标记增殖细胞。大鼠左眼接受电刺激(电刺激参数:双相方波电流:波宽3ms,频率20Hz,强度300uA,刺激时间持续lh),右眼为自身对照,并设假手术组,每组每时点为4只SD大鼠。电刺激后不同时间点(Id、4d、7d、lOd、14d)心脏灌注处死SD大鼠后摘除眼球制作视网膜冰冻切片,免疫荧光观察睫状

8、体边缘带BrdU阳性细胞以明确增殖细胞的数量及部位并计数,免疫化学染色共聚焦显微镜观察睫状体边缘带BrdU阳

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