fk228促进il3介导的人红系前体细胞的增殖与分化

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1、FK228促进IL3介导的人红系前体细胞的增殖与分化【摘要】目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂FK228在IL3介导的人红系前体细胞增殖与分化中的调节作用。方法:经粒细胞集落刺激因子动员的肿瘤患者外周血单核细胞中分离CD34+细胞,用含干细胞生长因子（SCF）、白细胞介素3（IL3）或SCF+IL3及不同浓度FK228的无血清培养液培养7d,分别用抗CD14、GPA、CD15及CD36单克隆抗体（mAb）染色并行流式细胞术（FCM）检测;将CD34+细胞用含SCF、IL3或SCF+IL3及FK228的半固体培养液培养,并行细胞集落分析

2、;将CD34+细胞用含SCF+IL3的培养液培养7d,然后分离CD36+GPA-细胞,将细胞用含有IL3+FK228的半固体培养液中培养,并行细胞集落分析。结果:FK228以一种剂量依赖方式促进CD36+细胞的产生,对CD14+细胞及CD15+细胞的产生无明显影响;0.5μg/LFK228可明显增加含IL3培养体系中CD36+细胞的数量;FK228可明显增加含IL3的半固体培养基中集落形成的数量及组成单个集落的细胞数;FK228可明显促进CD36+GPA-细胞在含IL3的半固体培养基中形成红细胞集落。结论:FK228可促进白细胞介素3

3、介导的人红系前体细胞的增殖与分化。【关键词】组蛋白脱乙酰化酶抑制剂白细胞介素3红系前体细胞增殖分化　　组蛋白乙酰化和脱乙酰化在基因转录调节中起着非常重要的作用［1］。研究发现,组蛋白乙酰化在造血分化过程有起动基因转录的作用［2］。例如,参与不同谱系的造血细胞前体增殖和分化的转录共激活因子P300和CREB是一种组蛋白乙酰基转移酶［3］。此外。HDACs被发现可能参与急性髓系白血病的发生［4］。HDACs抑制剂已用于髓系白血病和其他血液性恶性疾病的治疗。在正常情况下应用HDACs抑制剂被报道可影响原始造血细胞前体的增殖,脐血的红系前体细胞的分化及

4、α球蛋白在成熟红细胞中的表达［5］。然而,HDACs在正常造血中的作用很大程度上是不知道的。本研究旨在利用HDACs抑制剂FK228探讨HDACs在成人造血中的作用,FK228是从色素杆菌中分离出来的一种天然多肽。FK228在培养液中比较稳定,它是一种前体药物,当进入细胞后才转化成为一种活性形式［6］。我们发现FK228可促进白细胞介素3介导人CD34+细胞分化成CD36+GPAlop;DSystems公司。HDAC抑制剂FK228购自FujisaAb)为(BectonDickinson产品),抗CD14PE、抗GPAPE、抗CD1

5、5FITC、抗CD36FITC抗体和鼠IgMFITC、IgG2bPEAnnexinVFITC凋亡检测试剂盒(为BDPharmingen公司);流式细胞仪(BectonDickinsonImmunocytometrySystems,MountainViem的培养皿中,用IMDM培养液培养。经过10～14d的培养,对细胞数＜50个的和细胞数＞50个的红细胞集落进行计数,红细胞集落根据其大小进一步分类。为了检测集落的类型,挑取不同的类型细胞,进行表型鉴定。　　1.2.3FCM分析免疫荧光染色按文献［7］方法进行。所用抗体皆为鼠mAb:抗

6、CD14PE、抗GPAPE、抗CD15FITC、抗CD36FITC、鼠IgMFITC或IgG2bPE作为同型对照。利用FCM分析。利用PI染色排除死细胞。　　1.2.4凋亡分析利用AnnexinVFITC凋亡检测试剂盒行AnnexinV/PI分析。简要步骤是将细胞用PBS洗涤后,在含有annexinvFITC和PI的结合缓冲液中孵育15min;行FCM检测凋亡细胞和坏死细胞。　　1.2.5统计学分析应用Studentt检验进行分析,以P＜0.05表示有统计学意义。　　2结果　　2.1FK228对CD36+红系、CD14+单

7、核系及CD15+粒细胞分化的影响FK228随着浓度的递增对CD34+细胞分化为CD36+红系、CD14+单核系和CD15+粒细胞的影响。经过7d培养,FK228在IL3和SCF+IL3存在的条件下促进CD34+细胞分化为CD36+GPAloulatoryeffectofFK228onthegenerationoferythroidcellsfromCD34+cellsAb染色来鉴定红系细胞集落。经过10～14d的培养,在含有SCF或SCF+FK228的培养液中没有集落形成。在仅含有IL3的培养液中,主要是细胞数小于50红细胞集落的形成。而

8、在其中加入FK228后可导致红细胞集落的数目明显增加（图2）。这些集落主要由CD36+GPAloationbyCD34+cellswithIL3an