chd2调控大脑皮层发育过程中神经前体细胞的增殖与分化

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1、密级：保密期限：CHD2调控大脑皮层发育过程中神经前体细胞的增殖与分化CHD2DirectstheProliferationandDifferentiationofNeuralProgenitorCellsintheDevelopingCerebralCort‘CereDcortex学号姓名学科专业研究方向指导教师完成时间答辩委员会主席签名D201102057沈天津细胞生物学神经干细胞增殖与分化焦建伟研究员2014年05月弦出独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除

2、了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：揿幸擀日期：芦f忙。翻莎咖学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：歹铝j夕巧雩签字日期i扪f，峰年。∥月衫日导师签名：签字日期：舻婶年萌月以日摘要在真核生物中，染色质动力学研究在生物学尤其是在发育生物学备受人们关注。研究发现大部分ATP依赖的染色质重塑复合物通过结合广谱表达的基因启动子或者特异性基因的启动子从而调控染色质的动力学变化，进而调控真核生物基因表达。CHD家族蛋白(染色质解旋酶DNA结合蛋白)是一类含有染色质结构域(chromodomains，chromatinorganizationmodifie

4、r)、SNF2相关解旋酶／ATP酶结构域以及特异性DNA结合结构域的蛋白质，主要参与染色质结构的重塑和基因转录调控。CHD2属于CHD亚家族I，参与哺乳动物发育，肿瘤抑制，DNA损伤修复。相关研究表明CHD2与癫痫性脑病、生长迟缓、脊椎弯曲、智障相关。在大脑皮层发育过程中，神经前体细胞(neuralprogenitorcells，NPCs)分化产生各种类型的神经元和胶质细胞，从而形成神经系统。尽管CHD2属于ATP依赖的染色质重塑复合物，但其大脑皮层发育中的作用仍不清楚。我们首先发现内源性的CHD2在神经干细胞里特异性表

5、达，因此CHD2可能参与调控神经干细胞(NSCs)的自我更新。通过体外敲降实验证实，敲降CHD2之后，促进所分离的原代神经干细胞的神经元分化同时抑制其自我更新。此外，我们首次采用胚胎电转技术(inuteroelectroporation)进行体内研究CHD2在大脑皮层发育过程中的作用。在E13．5d的神经前体细胞中特异性敲降和过表达CHD2，表明CHD2参与调控神经前体细胞的增殖。在CHD2敲降后，位于VZ／SVZ(ventricularzone／subvertficularzone)的GFP标记细胞显著减少。通过Brd

6、u标记实验进一步证实，CHD2促进VZ／SVZ的神经前体细胞的S期细胞数目增加。CHD2敲降后VZ／SVZ的神经前体细胞的S期细胞数目减少。过表达CHD2之后，位于VZ／SVZ区的GFP标记细胞显著增加且VZ／SVZ的神经前体细胞S期细胞数目增加。最后，我们通过ChiP实验(chromatinimmunoprecipitation)证实CHD2通过结合REST(REl．silencingtranscriptionfactor)的启动子直接调控REST的转录，从而调控神经前体细胞的增殖与分化。此外，CHD2结合启动子区下游

7、的CDS区，可能通过其他机制来调控神经前体细胞的多能性。关键词：ATP依赖的染色质重塑复合物，CHD2，神经前体细胞，胚胎电转，ChiP，RESTAbstractThestudyofchromatindynamicsineukaryoteshasbeinganincreasinglyimportanttopicinbiologyresearchespeciallyindevelopmentalbiology．Alargenumberofadenosinetriphosphate(ATP)-dependentchromat

8、in-remodelingcomplexeshavebeendiscoveredthatareresponsibleforchromosomedynamics，eithergloballyorspecificallyatparticulargenepromoters．Basedonchromatindynamics，