定向分化神经前体细胞移植治疗脊髓损伤

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1、定向分化神经前体细胞移植治疗脊髓损伤【关键词】脊髓损伤脊髓损伤(spinalcordinjuries,SCI)导致神经细胞死亡、轴突断裂、神经传导功能障碍。中枢神经系统(centralnervoussystem,S)内神经元属于分化成熟细胞，死亡后很难自行修复，目前尚无有效办法恢复损伤脊髓的神经功能［1］。近来研究表明细胞移植在脊髓损伤治疗中有良好前景。干细胞具有多向分化潜能和无限增殖能力，因而干细胞移植在细胞移植策略中有着重要意义。近年来，研究发现多向分化潜能的干细胞在移植环境内(如脊髓损伤)其分化过程受多种因素影响。研究表明，定

2、向分化的神经前体细胞(或干细胞预分化)可以促进移植细胞有利分化，可能有助于提高细胞移植治疗脊髓损伤的效果。1神经干细胞的分化S形成和其它系统一样，系统发育过程中总是伴随细胞的增殖、分化和成熟。类似血液系统发生，S发生过程中也存在多向分化潜能的干细胞和定向分化的祖细胞、前体细胞等不同分化程度的细胞群。原始神经上皮变为成熟神经细胞过程中，细胞越成熟则分化潜能越小，最终形成高分化的成熟神经细胞。神经元及神经胶质细胞的形成过程必需经过定向分化的神经前体细胞阶段［2］。目前，研究发现两种不同性质神经干细胞。一种为表皮生长因子依赖性神经干细胞，

3、呈细胞球团状生长，又称神经球。可从小鼠胚胎期(E14)S分离，呈nestin阳性，能自我更新，分化形成神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞。培养生长依赖表皮生长因子，成纤维细胞生长因子不能单独维持其生长［3］。另一种为成纤维细胞生长因子依赖性神经干细胞，可从胚胎期(E10.5)小鼠神经管分离，亦能自我更新，分化形成三大类神经细胞。可在细胞悬液内或培养皿上生长，表皮生长因子不能代替成纤维生长因子进行细胞培养、分离［4］。S发育过程中还存在多种分化程度更高的神经前体细胞。少突胶质细胞-2型星形胶质细胞前体细胞(oligodendrocyt

4、e-type2astrocyteprecursor,O2A)为一类胶质前体细胞，可从新生大鼠视神经、皮层及脊髓分离。O2A可分化为少突胶质细胞和2型星形胶质细胞，但不能形成神经元。O2A进行体内移植后可分化为少突胶质细胞［5］。星形胶质前体细胞是另一类胶质前体细胞，可从胚胎期(E16)小鼠小脑内分离，不表达神经胶质酸性蛋白，培养依赖表皮生长因子，可分化形成星形胶质细胞，表达A2B5标记，不能产生少突胶质细胞，提示星形胶质前体细胞与O2A为两种不同的胶质前体细胞［6］。定向分化的胶质前体细胞(glial-restrictedprecu

5、rsors,GRP)为另一类胶质前体细胞，可来源于发育阶段脊髓，同时呈A2B5和nestin阳性。GRP与O2A不同，GRP可形成两种星形胶质细胞，O2A只产生一种星形胶质细胞［5,7］。此外，还有神经元定向分化的前体细胞，表达E-NCAM标记，其形态与神经上皮细胞、神经嵴细胞、胶质前体细胞均不相同。培养可维持前体细胞未分化状态，能分化成熟为多种神经元，不能产生少突胶质细胞和星形胶质细胞［8］。神经细胞成熟经历了早期未分化的多能干细胞阶段，分化形成各种神经前体细胞，最后产生成熟的神经细胞。神经细胞发生在时间、空间上有着严格顺序，不仅

6、与神经细胞自身分化状态有关，同时也受微环境影响［4,8,9］。因此，在细胞移植治疗脊髓损伤中应考虑到干细胞所处的分化(成熟)阶段。一方面干细胞分化潜能大，另一方面也应注意到移植(损伤)环境能否提供干细胞存活、分化的有利条件，以及如何控制移植细胞朝功能性神经元、髓鞘形成细胞分化(如少突胶质细胞)［10］。2移植微环境因素对移植细胞分化的影响移植细胞在体内的分化命运不仅与自身分化阶段有关，同时也受移植微环境的影响。成体S神经发生区域主要位于(脑)室下区域、海马、齿状回及中央管周围。脊髓神经干细胞可培养分化成三大类神经细胞。但移植到损伤脊

7、髓内往往分化为星形胶质细胞和少突胶质细胞，提示损伤脊髓微环境中移植的干细胞沿胶质细胞系分化。然而，干细胞移植到脑内神经发生区域则可分化形成神经元。研究表明，多能干细胞体内的分化行为受到移植环境的影响［11,12］。有研究报道，将人神经干细胞移植到成年大鼠正常纹状体-黑质区域，移植细胞主要分化为星形胶质细胞［13］。将成体神经干细胞移植到嗅球神经发生区域则可形成大量神经元［14］。同样，将人多向分化潜能神经细胞移植到成年大鼠脑内室下区、海马区，移植细胞可沿内源神经元前体细胞迁移途径移行，并在嗅球颗粒区、海马齿状回形成神经元［15］。成

8、年大鼠海马内分离的干细胞移植到大鼠海马区域，发现齿状回中移植细胞形成海马神经元，而移植到非神经发生区则形成胶质细胞。可见，S不同移植部位的微环境影响着移植干细胞的分化命运。移植微环境对干细胞分化的影响，给干细胞移植治疗脊髓损伤带来巨大