fk228促进il3介导的人红系前体细胞的增殖与分化

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1、FK228促进IL3介导的人红系前体细胞的增殖与分化【摘要】目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂FK228在IL3介导的人红系前体细胞增殖与分化中的调节作用。方法:经粒细胞集落刺激因子动员的肿瘤患者外周血单核细胞中分离CD34+细胞,用含干细胞生长因子（SCF）、白细胞介素3（IL3）或SCF+IL3及不同浓度FK228的无血清培养液培养7d,分别用抗CD14、GPA、CD15及CD36单克隆抗体（mAb）染色并行流式细胞术（FCM）检测;将CD34+细胞用含SCF、IL3或SCF+IL3及FK228的半固体培养液培养,并行细胞集落分析;将CD34+细胞用

2、含SCF+IL3的培养液培养7d,然后分离CD36+GPA-细胞,将细胞用含有IL3+FK228的半固体培养液中培养,并行细胞集落分析。结果:FK228以一种剂量依赖方式促进CD36+细胞的产生,对CD14+细胞及CD15+细胞的产生无明显影响;0.5μg/LFK228可明显增加含IL3培养体系中CD36+细胞的数量;FK228可明显增加含IL3的半固体培养基中集落形成的数量及组成单个集落的细胞数;FK228可明显促进CD36+GPA-细胞在含IL3的半固体培养基中形成红细胞集落。结论:FK228可促进白细胞介素3介导的人红系前体细胞的增殖与分化。【关键

3、词】组蛋白脱乙酰化酶抑制剂白细胞介素3红系前体细胞增殖分化11　　组蛋白乙酰化和脱乙酰化在基因转录调节中起着非常重要的作用［1］。研究发现,组蛋白乙酰化在造血分化过程有起动基因转录的作用［2］。例如,参与不同谱系的造血细胞前体增殖和分化的转录共激活因子P300和CREB是一种组蛋白乙酰基转移酶［3］。此外。HDACs被发现可能参与急性髓系白血病的发生［4］。HDACs抑制剂已用于髓系白血病和其他血液性恶性疾病的治疗。在正常情况下应用HDACs抑制剂被报道可影响原始造血细胞前体的增殖,脐血来源的红系前体细胞的分化及α球蛋白在成熟红细胞中的表达［5］。然而,HDAC

4、s在正常造血中的作用很大程度上是不知道的。本研究旨在利用HDACs抑制剂FK228探讨HDACs在成人造血中的作用,FK228是从色素杆菌中分离出来的一种天然多肽。FK228在培养液中比较稳定,它是一种前体药物,当进入细胞后才转化成为一种活性形式［6］。我们发现FK228可促进白细胞介素3介导人CD34+细胞分化成CD36+GPAlow不成熟红细胞,但不影响髓系细胞的产生。　　1材料和方法　　1.1材料重组人干细胞生长因子（SCF）、红细胞生成素（EPO）和白细胞介素3（IL3）,购自R&DSystems公司。HDAC抑制剂FK228购自Fujisawa

5、制药公司。MACSCD34+免疫磁珠分离试剂盒（MACS）;购自MiltenyiBiotec公司。PE标记的抗血型糖蛋白A（GPA,红系祖细胞的一种标记分子）单克隆抗体(mAb)为(Becton11Dickinson产品),抗CD14PE、抗GPAPE、抗CD15FITC、抗CD36FITC抗体和鼠IgMFITC、IgG2bPEAnnexinVFITC凋亡检测试剂盒(为BDPharmingen公司);流式细胞仪(BectonDickinsonImmunocytometrySystems,MountainView,CA,USA)。　　1.2方法

6、　　1.2.1CD34+细胞的分选经患者知情同意后,采集临床肿瘤患者经粒细胞集落刺激因子动员的外周血。利用MACSCD34+免疫磁珠按操作说明从单核细胞中分离CD34+细胞,经过重复筛选后,CD34+细胞的纯度通常可超过95%。将CD34+细胞在24孔培养板中利用含有SCF+IL3的无血清培养液培养,细胞因子按如下浓度使用:SCF50μg/L;IL310μg/L;在第3天进行半量换液。培养第7天,用抗CD36F1TC和抗GPAPE对培养细胞进行染色。然后利用流式细胞术（FCM）分离CD36+GPA-和CD36+GPAlow细胞。　　1.2.2细胞培养将C

7、D34+细胞用含SCF、IL3或SCF+IL3及FK228的无血清培养液在96孔板中进行细胞悬浮培养。培养3～4d后,进行半量换液。利用苔酚蓝染色对活细胞进行计数。对无血清的半固体培养,将细胞接种于35mm的培养皿中,用IMDM培养液培养。经过10～14d的培养,对细胞数＜50个的和细胞数＞50个的红细胞集落进行计数,11红细胞集落根据其大小进一步分类。为了检测集落的类型,挑取不同的类型细胞,进行表型鉴定。　　1.2.3FCM分析免疫荧光染色按文献［7］方法进行。所用抗体皆为鼠mAb:抗CD14PE、抗GPAPE、抗CD15FITC、抗CD36

8、FITC、