pparγ激动剂高通量筛选模型的构建和应用

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1、分类号：密巧：公开續州＾ｆ：研巧生学位论文、．一论文题目（中文）ＰＰＡＲ激动剂髙通量筛选模型的构建和应用ｙＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＰＡＲａｏｎｉｓｔｐｐｙｇ论文题目（外文）－ｍｏｄｅｈｉｈｔｈｒｏｕｈｕｔｓｃｒｅｅｎｉｎａｓｓａｌｇｇｐｇｙ研巧生姓名张也也？学科、专业生物学细胞生物学研巧方向肿瘤生物学与药物筛选学位级别硕±导师姓名、职称杨金波教授论文工作起止年月２０１３年４月至２０巧年４月论文提交

2、日期２０巧年４月论文答辩日期２０巧年５月学位授予日期校址：甘巧省兰州市．．．．’．作－．一：＇；．．，．．＾‘－产‘兰一．－＇１Ｙ＇；，－部巧产－？？＊？．ｔ．．．Ｌ．．Ｉ／／原创性声巧本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人己经发表或未发表的成果、数据、观点等，均己明确注明出处，。除文中己经注明引用的内容外不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果

3、做出重要贡献的个人和集体，均己在文中ｉｕ明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名＂：杂心知日期：前小每关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。、本人完全了解兰州大学有关保存使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家，允许论文被查阅和借阅有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版；本人授权レ兰州大学可ッ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可［＾采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文

4、或与该一论文直接相关的学术论文或成果时，第署名单位仍然为兰州大学。本学位论文研巧内容：可公开□不宜公开，己在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。一＂Ｖ＂（请在上选项内选择其中项打），句。么论文作者签名：导师签名：爲－日期：日期：ｗｃＰＰＡＲｙ激动剂高通量筛选模型的构建和应用中文摘要一过氧化物酶体增殖物激活受体Ｙ（ＰＰＡＲ）属于核受体超家族成员，是种配丫，在糖脂代谢体激活型转录因子、炎症和癌症中起着关键作用。在人体脂肪组织细胞，巨喧细胞及肝、肺等脂肪胆存细胞

5、中均有不同程度的ＰＰＡＲ表达活性。当丫，有配体存在时，被激活的ＰＰＡＲｙ可Ｗ发挥促进脂肪细胞的生成和分化缓解膜岛，，素抵抗，负向调控炎症反应调节肿瘤的发生发展及延缓組织器官纤维化等作用与多种疾病的发生发展都有着密切的关系。随着高通量药物筛选技术的不断发展，一基于範点或者祀信号的药物筛选逐步成为药物研发的最有效方式么。因此，构建一ＰＰＡ民种基于ＰＰＡＲｙ信号通路的高通量药物筛选模型，并应用于Ｙ激动剂的、筛选，，将会为屯血管相关疾病的治疗提供更多的候选药物开拓疾病治疗的新途径。一民本课题构建了

6、种基于ＰＰＡ信号通路的高通量药物筛选模型，并将其应用Ｙ，同时对得到的先导化合物做了初步探究于天然单体化合物的筛选。我们通过择ＰＰＡＲ，优选择ｙ组成型活化细胞，并对ＰＰＡＲｙ响应元件ＰＰＲＥ比例进行多次调整ＣＬ＞最终得到药物筛选模型细胞ＰＩＤ。该模型ＣｈａｎｇＬｉｖｅｒ为宿主细胞，Ｗ巧光素酶为报告基因，含有２３个ＰＰＲＥ重复序列的响应元件及完整ＰＰＡＲｙ表达元件。ｅｓ－通过ＤＮＡ测序、ＷｔｅｒｎＢｌｏｔ实验及传代实验证实该细胞模型成功插入目的元件并稳定性良好，能够应用于ＰＰＡＲ丫激动剂的筛选。随后

7、我们筛选了２５００余种天然单体化合物５，１５＃，复筛得到了种有信号激活作用的先导化合物其中Ｗ化合物作用最佳。通过ＭＴＴ方法及巧光活性检测，我们发现１５＃化合物细胞毒性５２激活作用－ｔ小，且相比于对照在１处理浓度下有倍的ＰＰＡＲ丫。ＷｅｓｔｅｍＢｌｏ一实验及半定量ＲＴ－ＰＣ民１５＃实验进步证实，化合物可提高ＰＰＡＲ丫在ＣＬＰＰＤ细胞－和ＴＨＰ１细胞中的表达活性。一综上所述，我们成功构建了种ＰＰＡＲＴ激动剂的高通量筛选模型，并将其应２一用于５００余种天然产物的筛选，最终得到５种先导化合物，

8、进步研究发现１５＃ＰＡＲ一ＰＰＡＲ化合物能思著激活Ｐｙ，并促进ＰＰＡＲｙ的表达，为进步筛选得到ｙ激一定的技术和理论依据动剂，寻找也血管疾病铅向药物提供了。关键词；ＰＰＡＲｙ，高通量药物締选，激动剂，天然产物，也血管疾病ＩＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＰＡＲｙａｏ