pparγ激动剂对香烟诱导大鼠copd模型肺血管炎症的作用

《pparγ激动剂对香烟诱导大鼠copd模型肺血管炎症的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、显微图像分析系统(Metanlorph／EvolutionMP5．0／Bx51)。二、实验方法1、动物模型的建立雄性SPF级Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心)40只，鼠龄也周，平均体重(180士20)g，随机分为4组，分别为正常对照组、模型组、罗格列酮组和罗格列酮+BADGE组，每组10只。正常对照组：标准饲养12周，每天放入自制玻璃舱(35cmx20cmx60em)内2h，但不给予吸烟；模型组：每天熏烟前半小时用生理盐水(按lOml／kg／d)灌胃，然后放入自制玻璃舱内用实验用香烟(大前门香烟，焦油量：

2、12mg，烟碱：0．9rag)熏2h，每次16支香烟，每周6天，连续12周，其它条件同C组；罗格列酮组：熏烟前半小时用罗格列酮(葛兰素史克)按30mg／kg／d的剂量灌胃，其它条件同COPD组；罗格列酮+BADGE组(RB组)：熏烟前半小时用BADGE(Sigma公司)按30mg／kg剂量腹腔注射，其它条件同ROSI组。2、肺功能测量大鼠腹腔内注射10％水合氯醛(3ml／kg}麻醉后，气管内插管，将其仰卧位放于小型动物容积描记器(AniRes动物肺功能分析系统，北京贝兰博科技有限公司)中，按照Wrighd6j等的方

3、法进行肺功能的测量。主要测量FVC、FEVo．3和FEVo．3／FVC等指标。3、组织标本的制作及检测肺功能测量完成后，采用放血法处死大鼠。用4％多聚甲醛经气道将右肺中叶进行冲洗30分钟，距肺门3mm处取出肺组织后，将其放在盛有4％多聚甲醛的容器中浸泡至少48h。然后进行切片(5urn／片)，后用苏木精．伊红(HE)进行染色及免疫组化分析。在HE染色下用光镜观察肺血管炎症及肺气肿改变情况；用MetaMorph／DPl0／BX41病理图像分析系统分析40倍镜下肺腺泡内动脉(50---250urn)并测量其血管内径、管

4、壁厚度及外膜面积，计算外膜炎症细胞总数，以每平方毫米血管外膜面积中炎性细胞的个数作为肺血管炎症的定量指标；采用免疫组化分析肺血管中P啪和TLR4蛋白表达强度。74、肺组织形态学分析．(1)肺泡平均内衬间隔(MLI)：在视野正中划‘十’字交叉，计数通过该交叉线的的肺泡间隔数(Ns)，测出十字线的总长度(L)，MLI=L／Ns，得到平均内衬间隔，其数值反映肺泡平均直径。(2)平均肺泡数(MAN)：计数每个视野内的肺泡数，除以该视野的面积，即得到MAN，其数值反映肺泡密度。5、统计学分析采用SPSSl6．0软件包进行分析

5、，数据以X+S表示，两组均数比较采用t检验，多组之间比较采用单因素方差分析(ANOvA)，单因素相关性分析用Pearson相关系数表达。P<0．05为差异有统计学意义。结果一、肺功能与正常对照组比较，模型组大鼠FEVo．3／FVCxl00％、PEF明显下降(P均

6、呈囊状扩张，部分融合成肺大疱，符合COPD肺部病理形态学改变(图1)。映肺气肿情况的客观指标MLI和MAN，模型组为(117．114-46．13)岬和(94．404．16．95)／pm2与正常对照组(33．294．4．20)岬和(357．744-58．76)时相比较，尸值均小于0．001。8图l，各组(n-10)大鼠肺组织病理学变化(HEx200)。a正常对照组，b模型组，c罗格列酮组，dRB组。1501∞50O正常对照组模型组罗格列酮组RB组图2A，各组(n．10)肺组织MLI，模型组与正常对照组对比，·P

7、0019囱．★魂三常对照组模型组罗格列崩组RB组图2B，各组(n_10)肺组织MAN，模型组与正常对照组对比，幸P<0．001三、肺血管炎症及重塑情况COPD模型组及RB组肺血管外膜可见大量炎症细胞，以淋巴细胞为主，血管壁明显增厚(图3A)，其炎症程度用血管外膜炎症细胞总数与血管外膜面积之比表示(图3B)，模型组、I出组【分别为(63．24+21．68)／mm?和(54．35+21．37)／删n2】与正常对照组(14．48．-1：4．27)／mm．2比较，差异有显著统计学意义(-te

8、7．92_a：6．21)／删一比较，差异亦有显著统计学意义(妒