pparα激动剂抑制脂多糖诱导thp

《pparα激动剂抑制脂多糖诱导thp》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、PPARα激动剂抑制脂多糖诱导THP作者：董春霞，胡豫，王华芳，孙春艳，王雅丹，何文娟，张小平【摘要】　　本研究探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α（peroxisomeproliferator-activatedreceptor-α，PPARα）的激动剂对单核细胞株THP-1中组织因子（tissuefactor,TF）表达的影响。用不同浓度的PPARα激动剂非诺贝特（fenofibrate）预处理单核细胞THP-1一定时间，然后分别用RT-PCR和199培养液、胎牛血清(Hyclon公司产品)。LPS（Sigma公司产品）。RT-PCRkit（

2、Toyobo公司产品），TRIZOL试剂（上海华舜生物公司产品），TF以及TFPI单克隆抗体（HTI公司产品），羊抗小鼠抗体（北京中山公司产品），非诺贝特（法国利博福尼公司产品）。　　方法　　细胞培养THP-1单核细胞悬浮于M199培养液(含10%胎牛血清)，在37℃、5%CO2条件下培养。THP-1细胞分别给以不同浓度的PPARα激动剂—非诺贝特（0、10、50和100μmol/L），然后加入LPS（100μmol/L）作用一定时间。LPS的浓度根据预实验确定。用台盼蓝检测细胞活力。　　THP-1细胞TFmRNA表达的RT-PCR检测按照试剂

3、说明书用TRIZOL提取THP-1细胞总RNA，用RT-PCRkit进行反转录，TF上游引物序列5'-GCTAGTATTATGGGCGTGAA-3';下游引物序列,5'-GAATACCAATGTCTCCTGCA-3'。内参照β-actin上游引物序列5'-GCCGGACTCGTCATACTCCT-3';下游引物序列5'-ATGCCATCCTGCGTCTGGA-3'。扩增按照下列条件进行：94℃预变性5分钟，进行以下循环：94℃30秒，50℃30秒，72℃45秒，共30个循环，最后72℃延伸5分钟。扩增产物用琼脂糖电泳，溴化乙锭显色。内参照β-a

4、ctin评价反应产物。　　THP-1细胞TF蛋白表达的SF,1μg/mlaprotinin）中，用DCProteinAssaykit进行总蛋白定量，蛋白上样，10%SDS-PAGE分离蛋白，转至硝酸纤维素滤膜上。含5%脱脂奶粉的封闭液4℃过夜。一抗于37℃孵育1小时，分别用PBS和TBS洗3次，二抗于37℃孵育1小时。ECL法检测蛋白质表达。同样方法测定TFPI蛋白量。　　统计学处理　　所有数据采用±SD表示，数据分析处理用SPSS11.0软件。不同浓度非诺贝特处理组及对照组间比较采用one-RNA水平和TFPImRNA水平变化　　检测结果见图

5、1、2和表1，2。LPS预刺激2小时后可见到细胞有TF表达。与对照组比较，10、50和100μmol/L非诺贝特处理的细胞TFmRNA水平降低（P<0.01），呈现浓度依赖性。但是内源性TF活性的抑制物-组织因子途径抑制物（tissuefactorpathRNA水平在各组中没有检测到显著差异（P>0.05）。Table1.EffectoffenofibrateonTFmRNAandproteinexpression（略）　　THP-1中TF蛋白和TFPI蛋白表达水平变化　　无LPS刺激时，未见单核细胞有TF的蛋白表达。单纯100μm

6、ol/LLPS刺激后可见THP-1有较多TF蛋白表达（光密度积分比值0.96±0.09），浓度大于10μmol/L的各组非诺贝特抑制了由LPS诱导的单核细胞THP-1的TF蛋白表达（0.42±0.08，0.58±0.06，0.74±0.06，P<0.01），呈现浓度依赖性（图3，表1），但非诺贝特对TFPI的蛋白表达没有作用（P>0.05）（表2）。Table2.EffectoffenofibrateonTFPImRNAandproteinexpression（略）　　讨论　　本实验证实PPARα激动剂——非诺贝特下调LPS诱导的T

7、HP-1细胞中TFmRNA和蛋白表达，但是对TFPI无影响。实验结果首次提示PPARα的激活在其调控动脉粥样硬化血栓形成中的可能作用。我们证实，未经诱导的THP-1单核细胞无TFmRNA和蛋白表达，LPS可以诱导THP-1细胞表达TF。用非诺贝特预处理单核细胞可以抑制LPS诱导的TFmRNA和蛋白表达，但是没有观察到非诺贝特对TFPI的mRNA及蛋白表达有抑制作用，说明非诺贝特对TF启动的凝血途径具有抑制作用，并且这种抑制作用不是通过影响TF的内源性抑制物-TFPI的合成来实现的，而是对TFmRNA和蛋白表达直接发挥抑制作用。PPARα激动剂抑

8、制动脉粥样硬化进程已经在临床实践中得到证实。PPARα可能在不同程度上干预动脉粥样硬化进程的途径大致有以下几方面：首先PPARα可通过改变血浆脂质和脂