网状玻璃碳联合犬骨髓基质干细胞体外培养及体内组织相容性的实验研究

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1、中图法分类号：R68学校代码：10661学号：2012163密级：硕士学位论文（学术型学位）网状玻璃碳联合犬骨髓基质干细胞体外培养及体内组织相容性的实验研究AnExperimentalStudyoftheCultivationinVitroandTissueCompatibilityinVivoofReticulatedVitreousCarbonCombinedCanineBoneMarrowStromalStemCells姓名：张魁伟专业：骨外科学研究方向：骨关节外科导师：赵德伟教授培养单位：遵义医学院2015年5月目录1.论文：………………………………………………………

2、…1中英缩略词对照表…………………………………………1中文摘要……………………………………………………2英文摘要……………………………………………………3前言…………………………………………………………5材料与方法…………………………………………………6结果…………………………………………………………9讨论…………………………………………………………15结论…………………………………………………………17参考文献……………………………………………………182.综述……………………………………………………………213.致谢……………………………………………………………304.作

3、者简介………………………………………………………31基金课题编号：国家自然科学基金项目（81371942）中英文缩略词表缩略词英文全称中文全称BMSCsBoneMarrowStromalStemCells骨髓基质干细胞SEMScanningElectronMicroscopy扫描电子显微镜RVCReticulatedVitreousCarbon网状玻璃碳BCBiocompatibility生物相容性PBSPhosphateBufferSolution磷酸盐缓冲液EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸1网状玻璃碳联合犬骨髓基质干细胞体外

4、培养及体内组织相容性的实验研究中文摘要目的：本研究旨在通过体外实验明确网状玻璃碳无毒性且有利于细胞生长，通过体内实验将网状玻璃碳植入股骨大转子6周、12周后采用组织病理切片，masson染色观察骨组织与网状玻璃碳的组织相容性。方法：体外实验：提取犬的股骨干远端的骨髓基质干细胞，采用差数贴壁和培养基选择法提取骨髓基质干细胞，在体外培养传代，取第3代细胞系通过细胞流式分析法进行细9-1胞鉴定。通过MTT实验检测网状玻璃碳的细胞毒性。取第3代细胞，以2.0×10L的细胞浓度种植在网状玻璃碳表面，联合培养14d后观察细胞的黏附与增殖情况。体内实验：选取犬为实验动物，手术切开暴露股骨大

5、转子，用钻头从股骨颈长轴与股骨外侧交点沿着股骨颈方向钻孔到达软骨下4-5mm处后植入网状玻璃碳，在术后6周、12周分批将犬处死，取植入材料的大转子处标本，采用固定、脱钙液脱钙，做病理切片，行masson染色观察骨组织及结缔组织在网状玻璃碳的长入情况。结果：(1)倒置显微镜观察结果显示：网状玻璃碳联合犬骨髓基质干细胞培养7天后材料近周细胞较少，材料外围有较多的细胞黏附生长；14天后细胞逐渐向支架材料靠近，材料表面及材料各个空隙内都有大量的细胞黏附，并有少量的细胞基质分泌；21天后细胞大量增殖，连接成片，填充在材料表面及空隙内，并有大量的细胞基质分泌，部分细胞出现接触性抑制。(2

6、)扫描电镜观察结果显示：细胞与材料共同培养14天后，细胞大多呈梭形，部分为多角形，延展性良好，细胞周围有大量细胞外基质，少量细胞伸出伪足黏附于材料表面及空隙中。(3)体内实验结果显示：大量的结缔组织、骨组织填充在网状玻璃碳的各空隙中。结论：体外实验结果表明网状玻璃碳无毒性且有利于骨髓基质干细胞黏附及生长。体内实验结果表明网状玻璃碳支架材料在动物体内有良好的组织相容性。关键词：网状玻璃碳骨髓基质干细胞组织相容性组织工程材料骨缺损2AnExperimentalStudyoftheCultivationinVitroandTissueCompatibilityinVivoofRet

7、iculatedVitreousCarbonCombinedCanineBoneMarrowStromalStemCellsAbstractObjective:Makingsurethereticulatedvitreouscarbonisnon-toxicandconducivetocellgrowthinvitro.Invivoexperiment,thereticulatedvitreouscarbonisimplantedintofemoralheadandthentissuesliceswer