骨髓基质干细胞体外培养及向造血系统细胞转化的实验研究

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1、骨髓基质干细胞体培养及向造血系统细胞转化的实验研究摘要目的：采用均匀设计法筛选及验证诱导SD大鼠骨髓基质干细胞Ill体外转化为造血系统细胞的可能性。方法：细胞培养在无菌条件下分离大鼠双侧股骨骨髓腔内骨髓，离心后弃上清培养24小时后换液。之后每3天换液。鉴定骨髓基质干细胞(bonemesenchymalstemcells)用表面抗原CD34，CD44结合细胞成纤维样生长进行鉴定。实验取用第三代细胞分成8组：’1对照组；2条件培养基组；3条件培养基+SCF+TPO；4条件培养基+SCF；5条件培养基+TPO；6培养基+SCF+TPO：7培养基+SCF

2、；8培养基+TPO；在倒置相差显微镜下观察各组细胞。结果：第四天观察到第四组诱导条件下贴壁的骨髓基质干细胞重新成为悬浮样集落生长细胞，其余各组未见明显形态学改变。以第四组诱导条件为模板扩大生产出悬浮聚集状生长细胞，采用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白(FITC．Annexin．v)、碘化丙锭(PI)双染色免疫荧光法【21检测细胞凋亡率，并与正常贴壁骨髓基质干细胞做统计学分析比较，比较结果未见显著性差异。证明细胞形态学改变不是因为诱导条件引起的细胞凋亡。对悬浮状细胞进行细胞表面抗原的免疫组织化学和免疫荧光的检测均为CD44阳性，CD34阴性。结论：在2

3、-ME及干细胞因子(SCF)的作用下，骨髓基质干细胞发生由贴壁成纤维样生长变为悬浮集落样长的形态学改变；细胞凋亡测定结果证实上述细胞的形态学改变系非细胞死亡或凋亡，提爪为细胞分化的一种正常的形态学变化：对转化后的细胞进行细胞表面抗原测定结果显示CD44阳性，CD34阴性表明：骨髓基质干细胞在此诱导条件下4天内并未引起细胞表面抗原(clusterOfdifferentiation)的改变。关键词：骨髓基质干细胞；体外培养；体外诱导；细胞表面抗原；免疫荧光；细胞凋亡ExperimentsofBoneMarrowStromalCellsinvitroc

4、ultureandtransformintoHematopoieticsystemcellsAbstract：Objective：BonemalTOWstromalcellsarecultivatedandidentifiedbbyusinguniformdesignmethodformSDratsthentransformitintohematopoieticsystemcells．Methods：Cellculture：Separationratsbilateralfemoralmedullarycavitiesbonemarrowinase

5、pticconditions，centrifugalbeforeabandonedaboveliqudi．After24hourschangetheliquid，alsoeverythreedays．Identificationofbonemarrowstromalcells(mesenchymalstemcells)withsurfaceantigenCD34，CD44andjointwithcellsfibrousgrowth．Experimentalgroupsaredividedintoeightgroups：1comparisongro

6、up，2conditionsmediumgroup，3conditionsmedium+SCF+TPOgroup，4conditionsmedium+SCFgroup，5conditionsmedium+TPOgroup，6commonmedium+SCF。f-TPOgroup，7commonmedium+SCFgroup，8commonmedium+TPOgroup，Thenobservethedifferenceofeverygroupsinthemicroscope．Theresult：thefourthgroupstickbottle—w

7、allgrouthcellsunderthatconditioninducedtosuspendedgatheredgrowthcells，theothersgroupswithoutobviouslymorphologicchanges．Usingthefourthgroupinductionconditionsforexpandingproduction．FITC—Annexin—VandPIdoingcellularfluorescenceimmunelandmeasuringapoptosisratecontrastwithcompari

8、soncellsdonotsignificantstatisticaldifferences．Proofofcellsmorpholog