神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间关于stat3的信号交互作用机制

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：201200033宁夏医科大学硕士研究生学位论文神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间关于STAT3的信号交互作用机制ThesignalCrosstalkaboutSTAT3pathwaybetweengliomacellsandtheHumanbrainmicrovascularendothelialcells学位申请人：刘雅琦指导教师：顾金海（副）教授门类级别：理学专业名称：生理学研究方向：神经胶质瘤信号通路所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一五年五月宁夏医科大学研究生学院INingxiaMedica

2、lUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeThesignalCrosstalkaboutSTAT3pathwaybetweengliomacellsandtheHumanbrainmicrovascularendothelialcellsStudent’sName:LiuYaqiSupervisor：GuJinhaiSubjectCategory:ScienceMajor:PhysiologySpecialty:SignalingPathwaysofGliomaSchool:NingxiaMedicalU

3、niversityCompletionDate:May,2015II神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间关于STAT3的信号交互作用机制摘要胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，具有死亡率高治愈率低的特点。据统计，恶性胶质瘤患者的中位生存期仅为17.9个月，而侧脑室旁胶质瘤预后更差仅能生存5.7-17.5个月。胶质瘤的发生是一个多因素参与、多基因改变、多步骤演进复杂过程，胶质瘤患者预后不良的原因与脑胶质瘤生物学行为有关，因此，研究胶质瘤恶性行为及其相关分子生物学机制具有重要的意义。但大部分研究都停留在肿瘤细胞内部的信号传递及肿瘤微环境营养成分的改变

4、对肿瘤细胞产生的影响，从而忽视了微环境中的一个重要组成成分即微血管内皮细胞。在肿瘤的增生侵袭过程中，微血管内皮细胞起了重要的作用，因此，研究微血管内皮细胞和肿瘤细胞之间的交互作用具有重要的理论意义和现实意义。近年来研究比较多的一条肿瘤细胞信号通路IL-6/STAT3很可能在这过程中起了桥梁作用，因此本课题选择该通路来研究神经胶质瘤细胞（A172/U251）与人脑微血管内皮细胞之间的信号Crosstalk机制。本课题采用以下实验技术方法来证明神经胶质瘤细胞（A172/U251）与人脑微血管内皮细胞之间关于STAT3的信号Crosstalk机制。应用Elisa

5、法分别检测24h，48h，72h神经胶质瘤细胞及其分泌因子VEGF对内皮细胞分泌细胞因子IL-6量的影响；应用westernblotting检测30min时内皮细胞及其分泌因子IL-6对胶质瘤细胞Stat3蛋白及其磷酸化状态的影响；应用CCK-8法检测24h，48h，72h内皮细胞及其分泌因子IL-6对神经胶质瘤细胞增殖情况影响；应用Transwell小室检测24h，48h，72h内皮细胞及其分泌因子IL-6对胶质瘤细胞侵袭状态的影响。所取得的实验结果如下：实验结果：IV1.VEGF(50ng.ml-1)组和共培养组（人脑微血管内皮细胞分别和A172，U2

6、51细胞共培养）的IL-6的表达量明显高于对照组(P<0.01)。2.30min时IL-6(50ng.ml-1)组，共培养组及（共培养+AZD1480）组的胶质瘤细胞STAT3/P-STAT3蛋白的表达能力明显高于对照组(P<0.01)，（共培养+AZD1480）组的胶质瘤细胞STAT3/P-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P<0.01)。3.IL-6(50ng.ml-1)组，共培养组及（共培养+AZD1480）组的细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P<0.01)，（共培养+AZD1480）组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P<0.01)。

7、结论：1）人脑微血管内皮细胞（HBMEC）及其分泌因子IL-6明显促进神经胶质瘤细胞(A172/U251)增殖水平及侵袭能力。2）人脑微血管内皮细胞(HBMEC)及其分泌因子白细胞介素-6能够促进神经胶质瘤细胞(A172/U251)P-STAT3蛋白的表达。3）神经胶质瘤细胞(A172/U251)及其分泌因子VEGF能够促进人脑微血管内皮细胞(HBMEC)分泌细胞因子白细胞介素-6。关键词:神经胶质瘤细胞，人脑微血管内皮细胞，STAT3/P-STAT3，增生，侵袭IIThesignalCrosstalkaboutSTAT3pathwaybetweengli

8、omacellsandtheHumanbrainmicrovasc