栀子组织培养及原生质体分离的研究

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1、分巧号脚３１学巧代号１化ＵＤＣ６１０巧級学巧２０１０１１化３６３ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕±学位论文扼子绝织培养及原生质体分离的研究学位申巧人张庆纽指导教师姓名何国振专业名称生巧学申请学位类型科学学位论文提交日期２０１５年Ｓ月■－：，１．】、－：Ｉ．．．，■．Ｉ？＇—．？？、？？＇／．？．．．—■■．．．＇■？－＇．

2、．＇ｒ；占．■■■户－＇＇町技，一Ｌ一广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明；所盤交的学位论文，独立进，是个人在导师的指导下行研究Ｘ。不含任何其他个人作所取得的成果除文中已经特别加抖注明引用的内容外，本论文或集体已经发表或撰写过的作品成梁。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明并致谢。。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担学位论文作者签名沸多１日期：从巧年５月王１日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，

3、同意学校保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版。，允许被查阅和借阅本人授权广州中医药大学可１处将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论专化者签名论文导师签名日期：〇文）５年？月王日Ｊ摘要目的：方沁／■檐子（偽？／３為＞５化／／？〇／施Ｅｌｌｉｓ）为茜草科Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）ａｒｄｅｎｉａ）（板子属化多年生小型常绿灌木。近年来，垢子的野生资源遭到严重破坏，具优良性状的野生资源日趋

4、减少。虽然应市场需求振子的栽培面积与产量得到大幅提升，，但由于定向栽培一，品种单Ｗ及农户的疏于管理等因素，使得振子的种质退化，抗逆性明显降低，病虫害现象十分严重。本文旨在通过姐织培养和原生质体融合的方法改善振子种质退化的问题，本文Ｗ扼子果实为外植体进行组织培养的研巧，为扼子优良种质的保护奠定技术基础，并进行了振子原生质体分离的研巧，为原生质体融合打下技术基础，期望为将来进巧檐子种质的改良搭建技术平台。方法：１振子的狙织培养１．１垢子果实无菌体系的建立（１）果实外植体消毒时间的筛选＾Ｎ－０成熟

5、度的振子果皮和种子为外植体．１％（：１ｔ＾，＾化，２种１２为灭菌剂筛选外植体最佳灭茜时间。（２）果实外植体切割方式的筛选Ｎ－成熟度的振子果实为外植体．％ＨＣｌ，Ｗ０ｌ，ｌ＾ｇ２为灭菌剂浸泡灭菌时间为９ｍｉｎ，筛选浸泡灭菌前檐子果实的最佳切割方式。１．２愈伤组织的诱导（１）果实外植体成熟度的筛选０．１％〇１ｍｎ１＾不同成熟度振子果实为外植体，化２为灭菌剂，浸泡灭菌时间为９ｉ，筛选适宜愈伤组织诱导的扼子果实的最佳成熟度。（２）愈伤组织诱导所需光照条件的筛选－成熟度的檐子果皮ＷＮ、种子团和

6、种子为外植体，筛选适合３种外植体的光照条件。（３）愈伤组织诱导培养基激素种类和浓度的筛选ＷＮ－Ｓ成熟度的檐子果皮、种子团和种子为外植体，ＷＭ为基础培养基，添加生－－长素２二２ｄｃｈｏｒｏｈｅｎｏｘａｃｅ－，４氯苯氧艺酸（，４ｉｉｐｙｔｉｃ２４Ｄ）和细胞分裂；，素６－－ｂｅｎｚａｄｅｎ－ｉｎｅ６ＢＡ３节基腺囑岭（６＾；），筛选诱导种外植体愈伤组织的最佳的激素条件。１．３愈伤组织的分化２－－ＷＭＳ为基础培养基，添加生长素，４二氯苯氧这酸、细胞分裂素６节基腺嚷Ｉ＇＇－－－－－

7、－－－－－吟和植物生长调节剂Ｎ苯基Ｎ１，２，３嗟二嗤５脈（？＾９４６１１＾１２，３化１扣啤，－ＴＯＺａｚｏ＾５ｌｕｒｅａ），ｙ，，采用固体培养和液体悬浮培养的方式筛选经继代培养的愈伤组织的最佳分化条件。１．４再生芽的增殖－乙酸－ＭＳ为基础培养基，添加生长素２，４二氯苯氧、细胞分裂素６节基腺囑＇－－Ｎ－－－－岭和植物生长调节剂Ｎ苯基１，２，３嚷二嗤５脈，对获得的再生芽进行增殖继代培养。２振子原生质体的分离２．１黄穏子叶片原生质体的分离－－Ｗ黄振子幼嫩叶片为外植体１０、Ｒ１０、，Ｗ纤维素酶Ｒ

8、离析酶酶解时间和甘露醇浓度为考察指标进行四因素四水平正交试验，分离黄檐子叶肉原生质体。２．２水扼子叶片原生质体的分离Ｒ－－１０、Ｒ１０、Ｗ水檐子幼嫩叶片为外植体，Ｗ纤维素酶离析酶酶解时间和甘露。醇浓度为考察指标进行四因素四水平