水凝胶培养的原代人脐静脉内皮细胞感染ⅱ型登革病毒对细胞产生il-29的影响

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1、中图分类号：R392.12单位代码：10660UDC：616-097学号：10660S120012学科专业代码:：100102密级：公开贵阳医学院201.5届颉士研究生学位论文(科学学位）水凝胶培养的原代人脐静脉内皮细胞感染II型登革病毒对细胞产生1L-29的影响EffectsofDENV-2infectionontheexpressionofIL-29inprimaiyHUVECsculturedonhydrogelsubstrates研究生：崔丽丽导师：左丽教授年级：2012级专业：免疫学二〇一五

2、年五月贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究己发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名（手写）：m"[曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用

3、学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：1、保密□，在_年解密后适用本授权书。2、不保密M：中图分类号：R392.12单位代码：10660UDC：616-097学号：10660S120012学科专业代码：100102密级：公开贵阳医学院2015届硕士研究生学位论文（科学学

4、位）水凝胶培养的原代人脐静脉内皮细胞感染Ⅱ型登革病毒对细胞产生IL-29的影响EffectsofDENV-2infectionontheexpressionofIL-29inprimaryHUVECsculturedonhydrogelsubstrates论文作者：崔丽丽指导教师：左丽教授申请学位：医学硕士培养单位：基础医学院学科专业：免疫学研究方向：抗病毒感染的分子免疫研究起止日期：2013年5月至2015年3月论文评阅人：盲评答辩委员会主席：王开功教授论文答辩日期：2015年5月27日二〇一五年三

5、月水凝胶培养的原代人脐静脉内皮细胞感染Ⅱ型登革病毒对细胞产生IL-29的影响专业：免疫学研究生：崔丽丽导师：左丽教授【摘要】登革病毒（Denguevirus，DENV）是一种虫媒病毒，主要是通过白纹伊蚊和埃及伊蚊进行传播，每年约有5000万-5.28亿人口受到感染。DENV感染可以引起登革热（DengueFever，DF）和危及生命的登革出血热（Denguehemorrhagicfever，DHF）及登革休克综合征(Dengueshocksyndrome，DSS)，其中DHF/DSS是重症的登革病毒感

6、染，其主要的特征之一是血浆渗漏。目前普遍认为DHF/DSS的发病机制主要包括病毒毒力因素，抗体依赖性感染增强效应（antibody-dependentenhancement,ADE），宿主因素，交叉反应性T细胞介导的免疫病理损伤以及细胞因子风暴等。众多发病机制的提出主要是因为模型的不同，目前小鼠、人血管内皮细胞主要以人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs）作为研究DENV感染发病机制的主要模型，但小鼠模型的运用并不能完全模拟人类的感染情况，

7、细胞模型则因作用因素单一也不能确切的反映感染症状。近年来研究发现组织基底硬度是影响细胞功能的主要因素之一，正常生理条件下血管基底膜及下层基质的弹性硬度值影响了多种与血管内皮细胞生存、复制、迁徙和维持稳态的重要生物学功能，不同弹性硬度条件下这些生物学功能水平差异较大。当前利用聚丙烯酰胺凝胶构建不同的组织硬度可以影响细胞的生物学功能，使其能够更贴近生理环境。本实验通过水凝胶模拟人血管内皮细胞基底膜弹性硬度，使体外模型的建立能够更贴近生理环境，为DENV发病机制的研究提供一个新的研究模型。目的利用水凝胶(h

8、ydrogel)模拟人类血管内皮细胞基底膜弹性硬度,以登革病毒2型(DENV-2)NGC株感染接种于水凝胶为基底的原代HUVECs,观察HUVECs在水凝胶与普通塑料培养瓶产生IL-29的情况。方法1.原代人脐静脉内皮细胞的分离、培养及鉴定：从健康新生儿的脐带中分离并培养原代HUVECs,利用免疫组织化学法和流式细胞术鉴定所分离的细胞。2.水凝胶的制备和细胞接种：将原代HUVECs接种于丙烯酰胺与聚丙烯酰胺混合配制的水凝胶。3.流式细胞术检测细胞凋亡及感