探索神经干细胞对去血清诱导pc12细胞凋亡的作用

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1、大连理工大学硕士学位论文神经干细胞对去血清诱导PC12细胞凋亡的作用姓名：朱蕾蕾申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：刘天庆20060601大连理工大学硕士学位论文摘要中枢神经系统疾病大都是因为不同程度的细胞凋亡而诱发的，如帕金森病(Parkinson。Sdisease，PD)，主要是由于中脑黑质多巴胺(Dopamine，DA)能神经元变性坏死所致。近年来，随着神经科学的飞速发展，神经干细胞(Neuralstemcells，NSCs)的移植己成为治疗神经系统疾病最有前景的治疗手段。肾上腺嗜铬细胞(PCI2cells)可分泌多巴胺，在

2、去血清诱导后，其凋亡与多巴胺能神经元的凋亡有许多共同之处，因此可以通过体外PCI2细胞去血清凋亡模型，研究在体的一些情况。本实验旨在通过研究NSCs对去血清诱导的PCI2细胞凋亡的影响，进一步为通过NSCs移植来治疗神经系统疾病提供相应的实验和理论依据。实验采用海藻酸钙胶珠化的NSCs与去血清培养的PCt2细胞共培养，通过CCK-8细胞活性检测法、Hoechst33342染色法、AnnexinV／PI双标以及PI细胞周期流式定量分析，对不同实验组细胞的活性、形态、凋亡率及细胞周期进行比较；同时使用GDNFELISA试剂盒检测培养基中胶质

3、细胞源神经营养因子(glialderivedneurotrophicfactor，GDNF)含量；并对胶珠的破囊工艺进行了优化。结果表明：①从CCK-8细胞活性检测分析，NSCs对去血清后PCI2细胞的存活率有明显的促进作用。②从形态学上观察，NSCs对去血清诱导的PCI2细胞凋亡有明显的抑制作用，减少染色体浓缩及凋亡小体个数。⑨由流式细胞仪对细胞周期的分析，去血清诱导后，PCI2细胞大部分滞留在G1期，细胞向s期过渡受阻；而与NSCs共培养后，PCI2细胞凋亡率显著降低，减少了由去血清引起的PCI2细胞阻滞现象，G1期细胞向s期和G2

4、期过渡基本未受阻断。④培养基中有GDNF，与由去血清诱导凋亡的PCI2细胞共培养的神经干细胞分泌GDNF能力增强。⑤确定了最佳的成囊和破囊工艺为：1．5％(1Ⅳt％)海藻酸钠，1．5％(吼％)CaCl2，成囊反应时间选择为10rain；柠檬酸钠与海藻酸钠和培养基混合液的体积比选择为2：1，破囊时间为7min。由此可见，将神经干细胞与去血清诱导凋亡的PCI2细胞共同培养，能够抑制PCI2细胞的凋亡，提高其存活率；神经干细胞对PCI2细胞的保护作用主要是通过其自身分泌的营养因子GDNF来阻止其凋亡。因此，将神经干细胞用于预防治疗神经系统疾病

5、有着光明的前景，是治疗PD疾病的重要手段之一。关键词：PCI2细胞；凋亡；神经干细胞；共培养；胶质细胞源神经营养因子神经干细胞对去血清诱导PCI2细胞凋亡的作用EffectofNeuralStemCellsonApoptosisofPCI2CellsInducedbySerumDeprivationAbstractNepalstemcells(NSCs)havebeenproposedastoolsfortreatingneurodegenerationbecauseoftheircapacitytogiverisetocelltype

6、sappropriatetothestructureinwlfichtheyaregrafted．InthePheochromocytomacelllinePCI2，whichhasbeenusedforstudyingthemechanismofParkinsondiseases，apoptosiscallbeinducedbyselnmdeprivation．ThepotentialcytoprotectiveeffectsofNSCsontheapoptosisofPCI2cellsinducedbyserumdeprivatio

7、nareofconsiderableinterestofOllrstudy．Inthestudy，theNSCsencapsulatedinCalcium—AlginateBeads(Ca-AlgBs)werecocuturedwithapoptoticPCI2inducedbysernnldeprivation．WeassessedtheeffectsofNSCsonPCI2cellsviabilityinserum—deprivationmediumbyCCK-8assaystodeterminewhetherNSCscanprev

8、entapoptosisofPCI2cellsinducedbyserum．-deprivated．ThemorphologicalchangesofapoptotiePCI2cellswereexamin