尼古丁对6-羟多巴胺诱导pc12 细胞凋亡的拮抗作用

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1、中国药理学与毒理学杂志２００４年２月；１８（１）：６－１０·６·ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００４Ｆｅｂ；１８（１）：６－１０尼古丁对６羟多巴胺诱导ＰＣ１２细胞凋亡的拮抗作用朱小南，汪雪兰，何进，余剑平，王琴，陈汝筑（中山大学中山医学院药理学教研室，广东广州５１００８９）摘要：目的探讨尼古丁对６羟多巴胺（６ＯＨＤＡ）ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）的脑中烟碱受体明显丢失，用尼古丁诱导ＰＣ１２细胞凋亡的拮抗作用及其与烟碱受体的（ｎｉｃｏｔｉｎｅ）治疗可以缓解ＰＤ病人的认知、学习、短期记关系。

2、方法用６ＯＨＤＡ诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞忆、运动和行为障碍等症状［１］；也有流行病学研究报瘤细胞株ＰＣ１２细胞凋亡的细胞模型；用ＭＴＴ、二乙道，吸烟与神经系统退行性疾病如ＰＤ和ＡＤ的患病酸荧光素活细胞染色、流式细胞仪和ＤＮＡ琼脂糖凝率呈明显的负相关［２］，改善病人的症状，认为这可能胶电泳等方法检测ＰＣ１２细胞的凋亡；用尼古丁及Ｎ与烟草中所含的尼古丁成分有关；研究还显示，尼古型和Ｍ型受体拮抗剂预处理，观察尼古丁的拮抗作丁对中枢神经系统有一定的保护作用［３～５］。但其保用及其与受体的关系。结果尼古丁可明显拮

3、抗６护机制仍未清楚。由于６羟多巴胺（６ｈｙｄｒｏｘｙ－１）诱导ＰＣ１２细胞凋亡，呈钟型浓ＯＨＤＡ（５０μｍｏｌ·Ｌｄｏｐａｍｉｎｅ，６ＯＨＤＡ）通过使儿茶酚胺神经元变性可复度效应关系，１０·Ｌ－１尼古丁的拮抗作用最强。μｍｏｌ制ＰＤ的大鼠模型。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株用１０·Ｌ－１尼古丁预处理ＰＣ１２细胞２ｈ可明显μｍｏｌＰＣ１２细胞与多巴胺神经元有许多特性相似，因此，本降低６ＯＨＤＡ诱导的细胞凋亡。用１０·Ｌ－１六实验用ＰＣ１２细胞作为ＰＤ的体外细胞模型［６～８］，探讨μｍｏｌ甲溴胺阻断

4、烟碱受体，可取消尼古丁对６ＯＨＤＡ诱导尼古丁对６ＯＨＤＡ所致ＰＣ１２细胞损伤的保护作用以细胞凋亡的拮抗作用；但用阿托品阻断Ｍ型胆碱受及与烟碱受体的关系。体，对尼古丁的拮抗作用则无明显影响。结论尼古丁对６ＯＨＤＡ诱导的ＰＣ１２细胞凋亡有明显的拮１材料与方法抗作用，这种作用由烟碱受体所介导。关键词：尼古丁；受体，烟碱；羟基多巴胺类；凋１．１材料与药品亡；细胞，ＰＣ１２大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株ＰＣ１２细胞由中国科学院上海细胞研究所细胞库提供。９６孔培养板、培中图分类号：Ｒ９７１．９１养皿均为Ｃｏｒｎｉ

5、ｎｇ公司产品；ＲＰＭＩ１６４０培养基和胎牛文献标识码：Ａ血清购自ＧｉｂｃｏＢＲＬ；６ＯＨＤＡ、噻唑蓝（ＭＴＴ）、二乙酸文章编号：１０００３００２（２００４）０１０００６０５荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅ，ＦＤＡ）、尼古丁、聚赖氨酸（ｐｏｌｙｌｙｓｉｎｅ）、六甲溴铵（ｈｅｘａｍｅｔｈｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，Ｃ６）、目前，尼古丁及其受体的研究、烟碱受体激动剂二甲亚砜、碘化丙啶（ＰＩ）均为Ｓｉｇｍａ产品；琼脂糖凝胶的开发已成为人们关注的热门课题，这主要是由于和神经生长因子（ｎｅｒ

6、ｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）购自许多研究证实，神经系统退行性疾病如帕金森病ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司。ＧＡＳ７００１ＢＵＶＩ凝胶图像（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ′ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）和阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓ分析系统购自ＵＶＩ公司，Ｏｌｙｍｐｕｓ相差显微镜和荧光显微镜购自Ｏｌｙｍｐｕｓ公司。来稿日期：２００３０１１４接受日期：２００３０９１５［８］１．２ＰＣ１２细胞培养及凋亡模型的建立基金项目：国家卫生部科学研究基金资助项目（９８０１０大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞

7、株ＰＣ１２细胞在０８６）ＲＰＭ１６４０培养基（内含５％马血清、５％小牛血清和作者简介：朱小南（１９６３－），女，云南石屏人，副主任技师，主要研究方向为神经药理学；陈汝筑（１９４５－），男，广东５％胎牛血清）中分裂增殖，并保持嗜铬细胞瘤的特梅县人，教授，主要研究方向为神经药理学。性。当培养基中加入ＮＧＦ，ＰＣ１２细胞即停止分裂增联系作者Ｅｍａｉｌ：ｙｕｊｉａｎ＠ｇｚｓｕｍｓ．ｅｄｕ．ｃｎＴｅｌ：（０２０）殖，胞体增大并形成突起，表现交感神经元的特征。取加入ＮＧＦ（１００·Ｌ－１）后培养４ｄ的ＰＣ１２细

8、胞，经８７３３０５６１μｇ中国药理学与毒理学杂志２００４年２月；１８（１）·７·０．２５％胰蛋白酶消化后制成细胞悬液待用。加入５０Ｔａｂ１．ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｃｏｔｉｎｅｏｎＰＣ１２ｃｅｌｌ·Ｌ－１的６ＯＨＤＡ处理２４ｈ诱发ＰＣ１２细胞凋亡，ｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙ６ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ（６ＯＨＤＡ）μｍｏｌ加入６ＯＨＤＡ前２ｈ分别加入不同浓度的尼古丁，观察Ｎｉｃｏｔｉｎｅ／６ＯＨＤＡ／Ｓｕｒ