姜黄素对mpp诱导pc12细胞凋亡的抑制作用.doc

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1、n(Cur)againstPC12cdbyl-methyl-4-phendthemechanisms.MsusedtodetecttheceainingflowcytometrlyzethePC12cellapoprobeofrhodaminel2measurethemitochon)，dihydrohodaminelwasusedtodetectthe姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用作者：陈静，李波，李红军，肖长义【摘要】目的观察姜黄素(Curcumin，Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响，并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率，碘化丙啶染

2、色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡，罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位，双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后，细胞存活率显著下降(P【关键词】姜黄素；1-甲基_4-苯基-吡啶；细胞凋亡；活性氧；帕金森病Abstract：ObjectiveToinvestigatethecytopretectionofcurcumiellapoptosisinduceylpyridium(MPP+)anethodsAMTTassaywallvitality,andPIsty(FCM)wasusedtoanaptosis,fl

3、uorescent3stainingwasusedtodrialpotential(△少m23(DHR)stainingFCM1evelsofreactiveoxResultsPC12cellswygenspecies(ROS).ereexposedtodifferentconcentrationsofMPP+for24hours.Thecellsvitalitydecreasedsignifleantly(P帕金森病是一种常见的中枢神经系统变性疾病，形态学研究表明PD病人脑内多巴胺能神经元呈凋亡样改变，提示细胞凋亡可能参与了PD的发病过程［1］,但其具体机理尚未完全明了，目前认

4、为可能与线粒体功能障碍、氧化应激反应增强导致活性氧(ROS)过多有关。目前还没有根治帕金森病的有效方法，现有的主要治疗方法只能在发病初期缓解症状，随着用药时间的延长，药效逐渐下降，并且常常出现严重的副作用［2］。因此现在研制和开发疗效高、副作用少、能真正阻止病程发:的治疗药物是临床迫切需要解决的问题近年来天然药物在治疗神经退行性病中的作用已经引起各国学者的广泛关注。姜黄是一种多年生的草本植物，在亚洲的热带地区广为栽培。Cur是从姜黄根茎中提取的一种酚性色素，是姜黄的重要活性成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血脂等广泛的药理作用，但在保护神经元方面的研究少见。1-甲基-4-苯基-吡

5、啶可以引起大鼠脑DA能神经元凋亡，成功复制PD模型。大鼠嗜铬细胞瘤细胞系在细胞形态、结构和功能上与神经元极其相似，能与原代培养的神经细胞说明一致的问题，并且其含有的膜受体及合成的递质与黑质DA能神经元相似，因此该细胞株可作为DA能神经元模型。所以MPP+制备的PC12细胞模型常作为研究PD的细胞模型［3］。本试验小组选择MPP+诱导PC12细胞凋亡，复制H)模型，观察Cur对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用，并对其可能的作用机理进行初步探讨，为今后深入研究Cur在治疗PD中的作用及其机理提供实验依据，也为研发天然抗PD药物提供新思路和新方法。1材料与方法试剂Cur,MPP

6、+,四氮p坐蓝，硬化丙陡(Propidiumiodide,PI),罗丹明123，双氢罗丹明123，二甲基亚砜购自Sigma公司；RPMI-1640培养基，马血清和胎牛血清购自GibcoBRL公司；胰蛋白酶购自华美生物试剂公司。仪器流式细胞仪，美国BECKMAN-COULTER公司产品；倒置荧光显微镜，日本Olympus公司产品；二氧化礎孵箱，HeraCell公司产品；离心机，上海安亭科学仪器厂产品。细胞培养和药物处理PC12细胞株置于含10%马血清、5%胎牛血清的RPMI-1640培养液中，于37°C、5%C02条件下培养。在细胞对数生长期加入药物处理，实验分组为：①空白对照组(

7、control):在细胞培养体系中不加入任何药物；②Cur组:在细胞培养体系中加入Cur；③MPP+组:在细胞培养体系中加入MPP+；④Cur加MPP+组:在细胞培养体系中加入Cur和MPP+。各实验组设三个平行对照。MTT比色法检测细胞存活率取对数生长期细胞，以X105/m1接种于96孔培养板，100ul/孔。在37°C、5%C02条件下培养过夜后，按分组要求给以不同处理因素。培养24h后，每孔加5mg/mlMTT2OpI，再培养4h，倾去培养液，加DMS0150U1/孔，待甲