巴西橡胶树3个wrky转录因子的克隆与鉴定

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1、学校代码：学号：分类号：密级：洛大營硕士学位论文题目：巴西橡胶树个转录因子的克隆与鉴定作者：刘建、汀指导教师：杨礼富部智类别：学术型专业：农业生物技术时间：二〇一五年五月IsolationandCharacterizationofthreeWRKYtranscriptionfactorsfromHeveabrasiliensisAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgronomy.ByLiuJian-ti

2、ngSupervisor:Major:AgriculturalBiotechnologySubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创辟声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果《对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：參说之丨曰期：次年上月知曰学位论文版权使用授权说明本人完全

3、了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递服务和交换服务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：导师签名：曰期年月如曰曰期：对年了月七日本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全

4、文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年：口一年年发布。论文作者签名：匈礙导师签名广月曰曰期：月日期年摘要类转录因子是高等植物中成员众多的一类转录因子家族，不仅参与对生物和非生物的胁迫反应，还广泛参与植物生长发育及多种代谢途径的调控。研究从巴西橡胶树（品系中克隆了个转录因子，即、和并在此基础上对其序列特征、亚细胞定位及表达调控特性进行了分析。采用技术从巴西橡胶树中克隆获得个转录因子，即的和奶基因全长序列，其全长分别为、和、和预测编码蛋白氨基酸数为、和个对个转录因子的序列特征进行生物信

5、息学分析，结果显示，三者均含有个高度保守的序列和锌指结构，其锌指结构为型，属典型的类家族转录因子，并且蛋白在进化过程中具有较高的保守性；构建了个基因与绿色荧光蛋白的融合表达载体，并利用农杆菌介导法转化烟草对其亚细胞定位进行了分析。结果表明，这转录因子均定位于细胞核；利用实时荧光定量技术，研究了的和册基因在橡胶树不同组织、不同发育时期叶片、不同激素处理以及不同胁迫等条件下的表达模式。分析结果表明，在不同组织中，和在叶片中具有较高的表达量，而在根中的表达量最高，其次为叶片；在不同发育时期叶片中，三个基因均在衰老叶片

6、中高丰度表达；和受乙烯利、水杨酸和茉莉酸甲酯诱导上调表达，受脱落酸（诱导下调表达，受脱落酸（和诱导下调表达，在和处理下，呈现上调表达；在氧化胁迫条件下，个基因均都上调表达；在盐胁迫下，和的表达受影响不明显，而册的的表达显著上调；在干旱胁迫条件下，翻的表达呈现先上调后缓慢下调的趋势，和则受其影响不明显；机械损伤条件下，和杉表达先上调后下调，而的受其影响不明显。关键词：巴西橡胶树转录因子；基因克隆；表达分析；亚细胞定位ABSTRACTWRKYtrancriptionfactorsconstituteagenesup

7、erfamilyinhigherplants，，，，，、，、、、、，；KEYWORDS：目录弓转录因子研究进展转录因子的发现转录因子的结构和分类转录因子的生物功能橡胶树转录因子研究进展叶片衰老研究进展叶片衰老的生理生化指标激素相关的叶片衰老研究胁迫有关的叶片衰老研究分子水平上叶片衰老研究是调控叶片衰老的主要转录因子家族本研究的目的和意义本研究的技术路线材料与旅植物材料橡胶树不同组织和不同时期的叶片的采集橡胶树不同处理叶片的采集质粒及菌种质粒菌种傾剂培养基核酸提取试剂提取半定量分析材料的合成引物设计他视基因半定量

8、分析目的基因的克隆克隆载体构建目的基因胶回收目的基因酶切和连接目的基因转化大肠杆菌重组质粒提取基因生物信息学分析转录因子亚细胞定位检测融合表达载体构建农杆菌介导转化烟草农杆菌感受态制备2.10.2.2重组质粒转化农杆菌：：农杆菌转化烟草叶片利用分析转录因子的表达模式荧光定量引物设计荧光定量标准曲线的制作荧光定量检测各个基因在不同材料中的表达丰度结果与分析半定量质量检测半定量分析结果目的