宫内炎症致脑白质损伤新生大鼠的脑组织epo及epor mrna的表达及rhepo的治疗作用研究

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1、分类号：R722密级：UDC：610学校代码：11065博士专业学位论文宫内炎症致脑白质损伤新生大鼠的脑组织EPO及EPORmRNA的表达及rhEPO的治疗作用研究刘燕指导教师姜红教授学位类别临床医学博士专业领域儿科学答辩日期2015.5.28答辩委员会主席孙若鹏教授宫内炎症致脑白质损伤新生大鼠的脑组织EPO及EPORmRNA的表达及rhEPO的治疗作用研究摘要目的孕鼠腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）制作宫内炎症致新生鼠脑白质病变动物模型。对脑白质病变新生鼠腹腔注射

2、重组促红细胞生成素（recombinanthumanerythropoietin,rhEPO）rhEPO，通过内源性EPO/EPORmRNA及CD68、GFAP、MBP的检测和神经行为学评分，探讨rhEPO对新生大鼠脑白质病变近期和远期的神经保护作用，为临床应用rhEPO治疗早产儿脑白质病变提供依据。方法30只Wistar孕鼠（孕龄15天）随机数字法分为实验组和对照组。实验组腹腔注射LPS300μg/kg制作早产儿脑白质病变动物模型，对照组Wistar大鼠腹腔注射生理盐水(Normalsalin

3、e,NS)1mL/kg作为对照。新生大鼠出生后，实验组与对照组各选30只新生鼠4%多聚甲醛灌注取脑，左侧脑组织进行HE染色，明确脑白质损伤情况；右侧脑组织用于实时荧光定量RT-PCR法检测胼胝体促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）及EPORmRNA水平。实验组随机数字法取60只新生鼠随机分为LPS+rhEPO组（n=30）和LPS+NS组(n=30)，分别于出生后即刻一次性腹腔注射rhEPO（5000IU/kg）和生理盐水（1mL/kg）。对照组随机数字法取60只新生鼠随机分为

4、NS+rhEPO组(n=30)和NS+NS组(n=30)，分别于出生后即刻腹腔注射rhEPO（5000IU/kg）和生理盐水（1mL/kg）。各处理组分别于用药后后第3天、第7天随机取10只新生鼠，进行脑组织HE染色,免疫荧光法进行CD68、GFAP及MBP的检测。出生后2周各处理组随机选取10只大鼠进行神经行为学评分。结果1.孕15天Wistar大鼠腹腔注射LPS后所产新生鼠HE染色脑室周围脑白质染色淡染，结构稀疏，呈网状改变；对照组脑白质组织结构正常。2.腹腔注射LPS大鼠所产新生鼠胼胝体E

5、POmRNA及EPORmRNA的表达明显高于腹腔注射NS组（P＜0.01）。3.生后3天HE染色显示LPS+rhEPO组新生大鼠脑室周围脑白质染色淡染，结构稀疏，呈网状改变；LPS+NS组新生大鼠脑白质结构稀疏，较LPS+rhEPO组加重。生后7天，HE染色显示LPS+rhEPO组脑室周围白质结构稀疏，染色较清晰；LPS+NS组脑白质结构稀疏，呈网状改变，染色不清晰。NS+rhEPO组及NS+NS组生后3天及7天脑白质组织结构正常，染色清晰。4.生后3天，LPS+rhEPO组、NS+rhEPO组

6、、NS+NS组CD68表达均较LPS+NS组显著下降（F=7.456，P＜0.01），生后7d，LPS+rhEPO组、NS+rhEPO组、NS+NS组GFAP表达明显低于LPS+NS组（F=5.121，P＜0.01），生后3天(F=2.628)、7天(F=1.425)各组间MBP表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。5.LPS+rhEPO组生后2周神经行为学评分（旷场试验、悬吊试验、斜坡试验、拒俘试验）与LPS+NS组、NS+rhEPO组及NS+NS组均无明显差别（F值分别为2.09、0.

7、60、0.11、0.37）。结论1.宫内炎症致脑白质损伤新生大鼠内源性EPOmRNA及EPORmRNA的表达明显增加。2.rhEPO可抑制脑白质损伤新生鼠的小胶质细胞和星形胶质细胞活化。3.rhEPO腹腔注射对脑白质损伤新生大鼠的远期神经行为改善作用尚不明确。博士研究生刘燕（儿科学）指导教师姜红教授关键词：促红细胞生成素；脑白质；新生，大鼠EPOandEPORmRNAExpressioninNeonatalRatswithWhiteMatterDamageassociatedwithIntrau

8、terineInflammationandtheTherapeuticEffectofrhEPOAbstractObjective:Toestablishanimalmodelsofintrauterineinflammationbyintraperitonealinjectionoflipopolysaccharide.Toinvestigatetherencentandlong-termneuroprotectiveeffectofrhEPOonneonatalratswithwhitema