氙气对脑白质损伤新生大鼠脑组织Bax、Bcl-2蛋白及EphrinB2、EphB4mRNA表达的影响.pdf

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1、分类号：R722密级：公开学校代码：11065学号：Y0115130051专业博士学位论文氙气对脑白质损伤新生大鼠脑组织Bax、Bcl-2蛋白及EphrinB2、EphB4mRNA表达的影响作者姓名李亮亮指导教师姜红（教授）专业领域儿科学培养单位医学部儿科学系答辩日期2018年5月13日氙气对脑白质损伤新生大鼠脑组织Bax、Bcl-2蛋白及EphrinB2、EphB4mRNA表达的影响摘要目的通过脂多糖联合缺氧缺血制作脑白质损伤动物模型，检测氙气干预对脑白质损伤新生大鼠脑组织内Bax、Bcl-2蛋白表达水平变化及氙气干预对脑白质损伤新生大鼠脑组织内Ep

2、hB4和EphrinB2mRNA表达的影响，进一步探讨早产儿脑白质损伤的发生机制，为早产儿脑白质损伤的临床干预提供理论依据。方法将3日龄Sprague-Dawley（SD）新生大鼠120只随机分为对照组（n=24），脑损伤组（n=24）和氙气干预组（n=72）。对照组新生鼠腹腔注射生理盐水（0.05mg/kg），仅游离但不结扎右侧颈总动脉，不做低氧处理；脑损伤组腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，0.05mg/kg），游离并结扎右侧颈总动脉并低氧处理1小时建立脑白质损伤（whitematterdamage，WMD）模型；氙气干

3、预组腹腔注射LPS（0.05mg/kg），游离并结扎右侧颈总动脉后进行低氧处理1小时并进行氙气吸入处理（50%氙气+30%氧气+20%氮气持续处理3小时）。根据脑损伤后氙气开始干预的时间分为C1、C2、C3三个亚组（n=24），干预时间分别为脑损伤发生后的0小时、2小时和5小时。各组新生鼠分别于0h、24h、48h、72h各取6只行多聚甲醛灌注后断头取脑组织，进行脑组织病理检测、蛋白质印迹法（WesternBlot,WB）检测Bax蛋白、B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma-2，Bcl-2）蛋白含量。同时进行逆转录-聚合酶链反应（revers

4、etranscriotion-polymerasechainreaction，RT-PCR）检测EphBrin2、EphB4mRNA的表达。采用独立样本t检验、单因素方差分析和Bonferroni法进行统计学分析。结果（1）实验新生鼠行为学监测：对照组新生幼鼠未出现明显异常反应。腹腔注射脂多糖及缺氧缺血处理后，脑损伤组和氙气干预组的新生鼠出现肢体抖动、烦躁、紫绀、呼吸急促等行为学异常。脑损伤组异常症状约在72小时消失。C1组新生鼠的症状约在36小时后消失；而C2组和C3组的症状约在48小时后消失。（2）脑组织病理变化：HE染色显示脑损伤组可见脑白质苍白

5、，结构疏松，细胞肿胀，核膜不清楚，细胞核固缩，可检测到细胞变性和坏死，神经纤维无序，胶质细胞数量增加；氙气干预C1组可见脑白质染色淡染，结构相对较完整，较少细胞变性坏死，病理变化较脑损伤组明显减轻。C2组可见细胞排列紊乱，部分核固缩；IC3可见脑白质组织结构疏松，核膜不清楚，细胞核固缩。C2、C3组病理变化较C1组明显，但病理改变较脑损伤组减轻。TUNEL染色显示对照组细胞凋亡不明显；与对照组比较，脑损伤组细胞凋亡明显。在C1、C2、C3组对比中，随开始干预时间延长，细胞凋亡逐渐明显，但均较脑损伤组减轻。（3）WB检测Bax蛋白含量：在相同的各检测时间

6、点，C1组和C2组Bax蛋白表达较脑损伤组显著下降，差异均具有显著统计学意义（P<0.05）；C3组Bax蛋白较脑损伤组在0h、48h、72h时下降，有统计学意义（P<0.05），在24h检测点无显著差异（P>0.05）。各实验组之间Bax蛋白表达量的差异在0h检测点并不显著，随着取样时间的推移，氙气干预组Bax蛋白表达水平较脑损伤组逐渐降低。（4）WB检测Bcl-2蛋白含量：在相同时间点，C1组和C2组蛋白的表达较脑损伤组显著性升高，差异均具有统计学差异（P<0.05）。C3组Bcl-2蛋白较脑损伤组在24h、48h、72h时升高，有统计学意义（P<

7、0.05），在0h检测点无显著差异（P>0.05）。各实验组之间Bcl-2蛋白表达量的差异在0h检测点并不显著，随着取样时间的推移，氙气干预组Bcl-2蛋白表达水平较脑损伤组逐渐升高。（5）RT-PCR检测EphB4、EphrinB2mRNA含量：与对照组相比较，在各检测时间点的脑损伤组中，新生鼠脑室周围白质EphrinB2、EphB4mRNA的表达水平显著升高，差异均具有统计学意义（P<0.05）。（6）与脑损伤组相比较，C1组及C2组EphrinB2mRNA的表达量在各个检测点均显著下降，具有统计学意义（P<0.05）；C3组EphrinB2mRN

8、A的表达量在48h时显著下降（P<0.05），在0h、24h、72h时无统计学意义（P>0.0