基于pd-1pd-l1信号通路研究补肾清毒法治疗chb的作用机制

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1、＋分类号Ｒ５１２．６２学校代巧１０５７２ＵＤＣ６１０密级公开学号２０１２１２０１００９户叫中爱為夫勞（邊）ｎｉ．ｉｉ—ｇｍｉｉ．，１－ｌ１１１＂，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕±学位论义ＰＤ－－基于１／ＰＤＬＩ信号通路研究补肾清毒法繪疗Ｃ邸的作用机制学位申巧人唐曼兩指导教师姓名刘亚敏专业名称中医化床基础申巧学位类型科学学泣论文提交日期２０１５年４月广州中医药大学学位论文原创性声明

2、本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加Ｗ注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个。人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明并致谢本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名＞疋日期：传年占月］日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保菌使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可将本学位

3、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名论文导师签名＿日期；＞巧年＾月日摘要研究目的：Ｖ－Ｄ－Ｌ通过研究皿感染患者阳１／Ｐ１信号通路的变化及补肾清毒法对其的影响，探讨ＨＢＶ免疫耐受的作用途径Ｗ及补肾清毒法抗ＨＢＶ可能的作用靴点和机制，阐明补肾＂清毒法治疗Ｃ册的免疫活化机制，Ｗ及册Ｖ持续感染免疫逃逸与中医伏气理论肾虚＂邪伏肝血病机的关系，揭示慢性乙巧伏气病机的本质，为补肾清毒法治巧則Ｂ提供较为全面的科学依据

4、。研究方法：１．将３９例符合纳入标准的慢性乙型肝炎患者随机分为中西药治疗和西药治疗组。中西药治疗组２０例，西药治疗组１９例，纳入１０例健康志愿者作为正常组。中西药治巧组服用补肾清毒方药和核巧酸类似物，西药组口服核昔酸类似物。分别在治疗前和治巧６个月后通过流式细胞检测术检测健康献血者及Ｃ册患者外周血ＣＴＬ（ＣＤ８ｔ）Ｄ－ＫＰＤ－Ｌ表面分子Ｐ１的表达。２１７４．通过ＣＣＫ８法对肿瘤细胞（ＣＥＭＸ）进行细胞毒性检测，确定补肾清毒方药的最高无毒浓度。３．采集甜６患者＾＾１及健康志愿者外周静脉血２０ｍｌ，分离ＰＢＭＣ，在６

5、孔细胞培养－－４－－板中ＷＲ１０培养基培养，ＷｒｈＧＭＣＳＦ，ｒｈ比，ｒｈＴＮＦａ和比１目刺激诱导ＰＢＭＣ分化为ＤＣ，待检测成熟后，加入补肾清毒方最高无毒浓度混合培养４８ｈ。Ｗ流式细胞仪ＣＤ－Ｌ－分别检测Ｄ细胞表面分子畑８０、ＣＤ８６、Ｐ１、ＰＤＬ２的变化。４．采集（：册患者＾１及健康志愿者外周静脉血１〇１１１，分？８版：，然１离后＾磁巧法分ＣＤ８ＴＣＤ８了，２４Ｒ２０ＰＨＡ离细胞和细胞然后在孔细胞培养板中培养基培养，Ｗ、比－２４８ｈ培养扩增，加入补肾清毒方最高无毒浓度混合培养。Ｗ流式细胞仪分别检测＋－Ｔ４－－－Ｃ

6、Ｄ８细胞表面分子ＣＤ２８、ＣＴＬＡ、阳１、ＰＤＬ１、阳Ｌ２的变化。研巧结果：’阳－１．正常人及細Ｂ患者外周血ＣＴＬ（ＣＤ扩１）表面分子１、ＰＤＬ１的表达－－治疗前灯旧患者外周血ＰＢＭＣ细胞上阳１和ＰＤＬ１的表达百分率均比正常人离。其中治疗前慢性病毒性乙型肝炎的患者外周ＰＢＭＣ表面分子ＰＤＬ１在Ｔ细胞ＣＤ８＋细胞及非Ｔ细胞ＣＤ８＋细胞上的表达差异有统计学意义的（Ｐ＜０．０５）。２４－治疗周后，中西药治疗组及西药治疗组讯Ｂ患者ＣＤ８巧细胞上ＰＤ１的表达水平较．治巧前上调，差异有统计学意义（Ｐ＜〇０１）ＰＤ］上升幅度小于中西药

7、：西药治疗组的治疗組，差异有统计学意义（Ｐ〈〇．０５）。２４巧细ＰＤ－治疗周后，中西药治巧组及西药治疗组ＣＨＢ患者ＣＤ８胞上Ｌ１的表这水平．较治疗前下调，差异有统计学意义（ＰＯ）０５）。Ｉ－２．ＣＥＭＸｍ肿瘤细胞的细胞药物毒性ＣＣＫ８法实验研究结果提示：补肾清毒方药最１２０即０．１２５ｍ］高无毒浓度是：ｇ／ｍ。－－３．（ＤＣ）表法共刺激分子畑８０、ＣＤ８６、ＰＤＬ、Ｌ２体外培养系统中树突状细胞１ＰＤ的表达：成熟树突状细胞镜下观察结果在倒置显微镜下能够见到胞体较前变大，胞体体一表长有像毛发样的触角，整个孕

8、育发展的形式是ＷＤＣ细胞的半悬浮形式生长的，从形态变化和生长状态角度，都符合典型树突状细胞