基于tgf--βsmad信号通路研究大柴胡汤防治慢性胰腺炎的作用机制

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1、陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名羞建嬗日期：扫J4年4月廖日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以

2、将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名垂亟盛日期：凹J牟年4月瞎日论文导师签名客搓!兰日期：矽，乒年钥锣日中文摘要洲㈣㈣㈣㈣帅IIlllIY2617420目的：小鼠尾静脉注射二丁基二氯化锡(Dibutyltindichloride，DBTC)联合lo％乙醇建立小鼠慢性胰腺炎模型，并给予大柴胡汤干预，观察胰腺纤维化进展中TGF—B(transforminggrowthfactor—B)／Smad(drosophi1amothersag

3、ainstdecapentaplegicprotein)信号通路的变化及大柴胡汤对其的干预作用。方法：选取健康雄性昆明小鼠90只，随机分成3组：空白组(Contr01，Con组)、慢性胰腺炎(ChronicPancreatitis，CP)模型组、大柴胡汤(EntrapementscatteredDaChaiHu)治疗组。通过尾静脉一次性给小鼠DBTC(8mg／kg)溶液，配合饲喂10％乙醇复制CP模型。于造模后三天随机将小鼠分为模型组和大柴胡汤治疗组，治疗组给予大柴胡汤(0．59生药／m1，69／kg／d)灌胃治疗，模型组给予等体积生理盐水灌胃。各实验组小鼠在造模后1周、2周、4周、

4、8周四个时间点分别麻醉处死动物，开腹于下腔静脉采血，离心后抽取血清，检测血清淀粉酶(Amylase，AMS)和透明质酸(Hyaluronicacid，HA)的变化；取胰腺组织，部分甲醛固定HE染色、胶原纤维(Masson)染色，观测胰腺组织病理学变化；提取胰腺蛋白，经免疫印迹技术(WesternBlot)检测TGF—BRI、p—Smad2／3以及Smad7的变化；提取总RNA，经实时荧光定量PCR(RT—PCR)检测基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase，脚P)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制剂(tissueinhibitorofmetalloproteinase

5、，TIMP)的表达变化。结果：一1．慢性胰腺炎模型小鼠胰腺组织病理学改变及各检测指标的变化HE染色显示：DBTC尾静脉注射1w可见胰腺明显呈急性炎症的表现，腺泡细胞点片状坏死，胰腺小叶水肿，炎细胞浸润。随着造模时间的延长，胰腺结构破坏更加明显，至4w可见纤维组织沉积，8w时胰腺纤维化明显，取代了正常的胰腺腺泡细胞和胰岛。胶原纤维(Masson)染色显示DBTC尾静脉注射2w后可见少量蓝染的胶原纤维在间质中出现。随着造模时间的延长，纤维化明显增加，至8w纤维化程度明显，胰腺腺泡萎缩，原有小叶结构破坏，大量蓝染的胶原纤维将胰岛或腺泡细胞分隔呈网格状，失去原有的圆形或椭圆样形态。胰腺可见大

6、量胶原纤维广泛增生，胰腺组织被纤维严重分割。DBTC尾静脉注射联合饮用乙醇后，伴随炎症反应及纤维化的发生，血清AMS的活性明显升高，CP2w、4w血清AMS维持在较高水平，8w血清AMS明显降低，与对照组有显著差异(P<0．01)。造模后2w、4w，血清HA明显升高，CP8w进一步升高，与对照组相比差异有显著差异(P<0．01)。CP模型组胰腺组织删P—lOmRNA表达先降低后持续升高，与正常组相比存在差异(P

7、胰腺组织中TGF—BRI的表达明显增强，2w表达最明显，而Smad7仅在CPlw时有微弱的表达：空白组胰腺组织中p—Smad2／3有少量表达，CP模型组各时间点胰腺组织中p—Smad2／3的表达均有不同程度增强，1w表达最明显。2．大柴胡汤对DBTC联合乙醇诱发的慢性胰腺炎的治疗作用HE染色显示：经大柴胡汤灌胃治疗后，与同时间点模型组相比，胰腺损伤明显减轻，至8w仅有少量纤维组织沉积。Masson染色显示：经大柴胡汤灌胃治疗后各时间点胰腺纤维化的程度明显减