fgf21与tgf--β信号通路在肝癌中的交互作用研究

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1、温州医学院硕士学位论文FGF21与TGF--β信号通路在肝癌中的交互作用研究姓名：江松敏申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：李校堃；蔡露；蔡琳2012-05-22温卅l医学院硕士学位论文F6F21与TGF—B信号通路在肝癌中的交互作用研究摘要目的1．研究FGF21与具有抑癌和促癌双重作用的T6F—p信号通路间的相互作用。2．探讨转化生长因子p1(transforminggrowthfactor，TGF—B1)对肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达的影响。方法1．(1)采用Westernblot方法检测HepG2

2、细胞的TGF—p1，TG卜pRII，Smad2，3，4，7的蛋白表达水平。(2)采用Q-PCR方法检测tiepG2细胞的TGF—p1，TGF—BRII，Smd2，3，4，7的mRNA表达水平。2．(1)采用Elisa方法检测大鼠血清中的TGF—p1含量变化。(2)腼染色和Masson染色观察大鼠肝脏组织形态学改变。(3)免疫组化方法检测TGF_S1，TGF—pRII，Smad2，3，4，7在大鼠肝脏组织中的表达。(4)时CR方法检测大鼠的TGF—p1，TGF—pRII，Smad2，3，4，7的mRNA表达水平。(5

3、)Westernblot方法检测大鼠的T6F—pl’TGF—pRII，Smad2，3，4，7的蛋白表达水平。3．(1)采用Westernblot方法检测不同诱导时间(O、0．5h、2h、6h、12h、16h、24h)下对HepG2的FGFR4表达的影响。(2)采用Westernblot方法检测不同TGF—B1浓度(Ong／ml、0．Olng／ml、0．1ng／ml、lng／ml、5ng／m1)下对HepG2的FGFR4表达的影响。(3)观察TGF—p1与不同FGFs合用对肝癌细胞增殖的影响。结果1．在不同F6F21

4、浓度的HepG2细胞中，TGF—B1随FGF21浓度增加而减弱，TGF—pRII随FGF21浓度增加而增强，Smad2／3，随FGF21浓度增加而增强，Smad4在Ong／ml时比lng／ml表达略高，但随FGF21浓度(1，5，10，20ng／m1)增加而增强，Smad7随FGF21浓度增加而减弱。2．在不同FGF21浓度的大鼠肝脏组织中，TGF—p1在正常组中表达较低，且在给药中随FGF21浓度增加而减弱，TGF—BRII在正常组和给药组中随FGF21浓度增加而增组强，Smad2／3在正常组和给药组中随F6F2

5、1浓度增加而增强，Smad4在正常组，Opg／kg．day，0．1pg／kg．day表达不明显，但Ipg／kg．day，温州医学院硕士学位论文lOpg／kg．day表达增强，Smad7在正常组表达较弱，且在给药组中随FGF21浓度增加而减弱。3．在相同TGF-131浓度下，FGFR4的表达随时问的延长而增强，HepG2细胞数随时间的延长而减少。在相同诱导时间下，FGFR4的表达随TGF-p1浓度的增大而增强，HepG2细胞数随TGF—pl浓度增加而减少。TGF-Dl对FGFl、FGF2、FGF7效应均有显著增强作用

6、，可使相应HepG2细胞数显著增加；对FGF21效应具有显著抑制作用，可使相应HepG2细胞数显著减少。结论1．FGF21通过促进TGF—B／Smads信号通路中的信号分子或受体的表达，或者通过下调此信号通路的阻断分子而抑制肿瘤发生。2．TGF一131可诱导肝癌细胞株HepG2的FGFR4表达，与FGFs合用可影响肝癌细胞的增殖。关键词FGF21HepG2细胞TGF一131smadFGFR42温州医学院硕士学位论文InteractionofFGF21andTGF-psignalingpathwayinliverCa

7、n￡erAbstractObjective1．FGF21hasthedualfunctionoftumorsuppressorandGanGer-promotinginTGF-Iisignalingpathways．2．ToinvestigatetheeffectofTGF-plonFGFR4expressioninHepG2cells．Methods1．(1)DetecttheproteinexpressionsofTGF·pl，TGF-13RII，Smad2,3，4，7ofHepG2cellswithWeste

8、rnblot．(2)DetectthemRNAexpressionofTGF-pl，TGF-13RII,Smad2,3，4，7ofHepG2cellswithQ-PCR2．(1)DetecttheserumexpressionofTGF-IMwithElisa．(2)WatchthechangeofmorphobgyinratliverwithHEstain