β-Catenin 信号通路在肝癌发生中的分子机制研究-论文.pdf

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1、2014年2月第l83[文章编号]1009—2188(2014)01—0003—06·手术学研究·Wnt／13一Catenin信号通路在肝癌发生中的分子机制研究李伟，谢肖俊。，陈胜林，李界明(1．中国人民解放军第101医院(无锡市太湖医院)肝胆外科，无锡214044；2．南通大学医学院，南通226001；3．中山大学附属汕头医院，汕头515063；4．汕头大学医学院第一附属医院，汕头515041)[摘要]目的探讨Wnt／13一Catenin信号通路在肝癌细胞增殖、迁移方面的影响和其在肝癌发生发展中的可能作用。方法体外培养HepG2和L02细胞，采用

2、免疫荧光和WesternBlot检测Wnt／13．catenin信号通路关键蛋白13-catenin、GSK313、cyclinD1和c—myc蛋白的表达水平。培养的HepG2细胞分别用浓度100ng／ml的Wnt3(x和20ns／ml的DKKI处理，采用CCK-8检测细胞增殖活力，流式细胞实验检测细胞周期，WesternBlot检测13一catenin、GSK313、cyclinD1和c—myc蛋白的表达水平，Trans．well检测HepG2的迁移情况。结果与正常肝细胞L02相比，HepG2细胞高表达B．catenin，cyclinD1和e．m

3、yc，低表达GSK313。Wnt3ct能够显著促进HepG2细胞的增殖活力，而DKK1能够显著抑制其增殖。与Wnt3a组相比，DKK1处理组细胞G0／GI期细胞比例增加，(68．6±0．5)％Vs(47．5±1．5)％(P<0．01)，而S期细胞比例减少(17．4±0．5)％VS(28．6士O．5)％，(P<0．O1)。WesternBlot检测结果说明，Wnt3a提高了p—catenin、cyclinD1和c-myc的表达水平，抑制了GSK313的表达，而DKK1抑制了B-catenin、cyc．1inDl和c-myc的表达。迁移实验透膜细胞数对

4、照组为(176．40±12．98)、Wnt3ct组为(238．20±18．38)、DKK1组为(110．40±9．46)，P<0．05。结论Wnt／13一catenin信号通路在促进HepG2细胞的增殖和迁移方面起重要作用，在肝癌的发生发展和转移中起着重要的作用，是肝癌发生的重要分子机制。[关键词]肝肿瘤；Wnt2蛋白质；印迹法，蛋白质；流式细胞术；荧光抗体技术[中图分类号]R735．7[文献标志码]ATheStudyofWnt／I~-cateninSignalingPathwayintheMolecularMechanismofLiverCanc

5、erLIWei’。，XIEXiao-jun3，CHENSbeng-lin4，Ll胁一ming(1．DepartmentofHepatobiliarySurgery，ChinesePeople~LiberationArmy101Hospital(WuxiTaihuHospita1)，Wuxi214044，脚“，China；2．NantongUniversityMedicalCollege，Nantong226001，Jia,~su，China；3．ShantouHospital锄toSunYat·senUniversity，Shantou515063

6、，Guangdong，Chi-na；4．First够lHospitalofShantouUniversityMedicalCollege，Shantou515041，Guangdong，China)Abstract：ObjectiveToexploretheefectsofWntsignalingpathwayonproliferationandmigrationinHepG2cellsanditspossiblemolecularmechanismintheoccurrenceanddevelopmentoflivercancer．Meth-od

7、sHepG2andL02cellswereculturedinvitro．Immun0nuorescenceandwesternblotwereusedtodetecttheexpressionoftheessentialcomponentsofWntsignalingB-catenin，GSK313，cyclinD1andc—myc．TheculturedHepG2cellsweretreatedwith100ng／mlWnt3(xand20ng,／mlDKK1invitro．AftertreatedwithITF，morpho-lo~calof

8、GES-1cellsWaSobservedusingmicroscope．ThencellcountingKit-8(CC