erk12信号传导通路在逆转肝癌细胞耐药性中的作用研究

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1、厦门大学学位论文原创性声明本人呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考其他个人或集体已经发表的研究成果，均在文中以适当方式明确标明，并符合法律规范和《厦门大学研究生学术活动规范(试行)》。另外，该学位论文为(裔超)课题(组)的研究成果，获得()课题(组)经费或实验室的资助，在嚆№即屦中·。睡‰)实验室完成。(请在以上括号内填写课题或课题组负责人或实验室名称，未有此项声明内容的，可以不作特别声明。)声明人(签名)：豫恩戈良ⅥI妒年箩月『1日肿⋯一一椰明f煳炒本人同意厦门大学根据《中

2、华人民共和国学位条例暂行实施办法》等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。本学位论文属于：()1．经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文，于年月日解密，解密后适用上述授权。f(＼／)2．不保密，适用上述授权。V(请在以上相应括号内打“√”或填上相应内容。保密学

3、位论文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。)声明入(签名)：陈．鬯、媛_L甲年箩月／7日摘要目的：1．检测肝癌细胞耐药株模型的耐药性。2．检测ERKl／2信号通路的特异性抑制剂索拉菲尼和PD98059对肝癌耐药细胞株耐药性的影响，以明确下调ERKl／2活性是否可以逆转肝癌细胞耐药性。3．检测经典耐药逆转剂环孢霉素A对ERKl和ERK2表达水平的影响，初步探索ERKl／2信号通路与逆转肝癌细胞耐药性之

4、间的关系。方法：1．使用阿霉素对人肝癌细胞株SMMC．7721和BEL．7402进行大剂量冲击方法诱导得到肝癌耐药株模型。采用Celltiter．Glo荧光细胞活性检测方法进行药敏实验并计算耐药指数，确定耐药细胞株的耐药性。2．用MTT法检测索拉菲尼、PD98059及环孢霉素A对肝癌细胞的毒性。3．WesternBlot检测索拉菲尼、PD98059及环孢霉素A作用后耐药细胞ERKl、ERK2表达水平的变化情况。4．采用Celltiter-Glo荧光细胞活性检测方法检测索拉菲尼、PD98059及环孢霉素A作用后耐药

5、细胞株对阿霉素敏感性的变化情况。结果：1．阿霉素诱导得到肝癌耐药细胞株SMMC．7721／ADM和BEL．7402／ADM。与亲本株相比，耐药细胞株对阿霉素的敏感性明显下降，阿霉素的半数抑制浓度(IC50)显著升高。SMMC．7721／ADM及BEL．7402／ADM的耐药指数分别为16．44、20．34。2．索拉菲尼及PD98059分别作用于耐药细胞株后，ERKl、ERK2的总表达水平无变化，磷酸化水平显著降低，且药物的作用浓度越高，效果越明显。与对照组相比，索拉菲尼及PD98059均提高了耐药细胞株对阿霉素的

6、敏感性。3．与对照组相比，经环孢霉素A作用后，耐药细胞株对阿霉素的敏感性明显提高。环孢霉素A对耐药细胞ERKl、ERK2的总表达水平无影响，但ERKl、ERK2磷酸化水平有所提高。结论：1．诱导得到的耐药株SMMC．772l／ADM和BEL．7402／ADM表现出稳定的耐药性。2．通过下调ERKl／2活性可以逆转肝癌耐药细胞株的耐药性。3．ERKl／ERK2磷酸化水平降低并未参与环孢霉素A对肝癌细胞的耐药逆转作用。下调ERKl／2信号通路活性并不是逆转肝癌细胞耐药的唯一途径。关键词：肝细胞癌；多药耐药：ERKl／

7、2；逆转Abstractobjective1．Toinducepolymultidrugresistant(MDR)cellmodelsfromhumanhepatocellularcarcinoma(HCC)celllinesbychemotherapydrugsanddetectresistanceofthedevelopedHCCMDRcells．2．TodetecttheeffectsofERKll2pathwayinhibitorssorafenibandPD98059onresistanceofHCC

8、drug—resistantcells，thustoexploreifdown-regulatingERKl／ERK2couldreverseresistanceofHCCMDRcells．3．TodeterminetheeffectofclassicreversalagentCyclosporineA(CsA)ontheERKI／2expressionlevel．Prd