升麻中环菠萝蜜烷型三萜化合物抗肿瘤活性及作用机制研究

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1、，也京甘＾皆聲促，中因聲３刮令獻硕±研究生学位论文北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｓ２０１２００９００３硕±学位论文升麻中巧凌萝蜜統型兰祗化合物抗脾瘤活性及作用机制硏究Ｓｔｕｄｏｎｔ－ｉｅｓｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｙｃｌｏａｒｔａ田ｅｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓｆｒｏｍＣｉｍｉｃｉｆｕａｏｅｔｉｄａＬ．ｇｆ所院；药用植物研究所姓名：孙海燕

2、指导教师：陈四保研究员导师小组：张冬梅副研究员学科专业：生药学研究方向：天然药物化学论文完成日期：２０１５年５月论文答辩日期：２０１５年６月４号北京协和医学院硕±研究生毕业论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进斤的研巧工作及取得的研究成果。除了文中将别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证一书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研充所做的任何贡献均已在论文中

3、作了明确的说明并表示谢意。＇、学位论文作者签名：巧鸿＾签字日期：州年６月ｒ日＞学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解北京协和医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权北京协和医学院可Ｗ将学位论文的全部或部分、、内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印缩印或扫描等复制手段保存汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）為。／Ｖ学位论文作者签名：外為秦导师签名；签字

4、日期：年月日签字日期：Ｔ年／月日《兴［＾学位论文作者毕业后去向：工作单位卖话；通讯地址邮编：Ｉ北京协和医学院硕止研巧生毕业论文摘要’传统中药升麻（Ｃ７／ｍｃｚｗａｏｅ化妃！Ｌ／ｇ／．）中含有大量环疲萝蜜院型Ｈ荫类成分，研巧表明该种植物来源的环葱萝蜜烧型Ｈ荫类化合物在体内外对多种肿瘤细胞均具有增殖抑制作用。然而前人的研巧多集中在对该类化合物的分离和结构鉴定上，本论文旨在对从升麻中分离的此类化合物ＳＭ３０６及ＳＭ３０８开展抗肿瘤机制研巧。主要研究

5、结果如下：－１．化合物ＳＭ３０６抑制乳腺癌细胞ＭＣＦ７细胞的增殖活性及机制研究。ＭＴＴ实验及克隆形成实验结果表明Ｍ３０６对ＭＣＦ－７细胞具有显著的增殖抑制作用，一Ｐ－／Ｉ染色分析发现ＳＭ３０６能够诱导ＭＣＦ７细胞周期阻滞于ＧｓＭ期，进步Ｗｃｃ－检测发现蛋白ｙｌｉｎＢｌ和ｐＣＤＫｌＣＴｈｒ）水平下调可能参与ＳＭ３０６诱导的细胞周期阻滞。Ｈｏｅｃｈｓｔ巧２５８染色观察及ＰＩ／ＡｎｎｅｘｉｎＶ双染分析表明ＳＭ３０６一－７ＳＭ３０６作用细胞可Ｗ诱导ＭＣＦ细胞发生调亡。进步研巧发

6、现后，细胞线粒体膜电位降低、Ｃａｓｐａｓｅ９及ＰＡＲＰ被剪切活化，促调亡蛋白Ｂａｘ水平上调而抗调亡蛋白Ｂｃ－ｔｅｒｌ２水平下调，同时磯酸化的Ａｋ（Ｓ４７３和Ｔｈｒ３０８）一－被抑制，提示ＳＭ３０６经线粒体途径诱导ＭＣＦ７细胞调亡。进步Ｗｅｓｔｅｒｎ－－ｂ－ａｆｌｏｔｉｎｇ检测表明，ｐＥＲＫｌ／２及上游主要调控蛋白ｃＲ水平均发生下调，ｐａｆ－提示Ｒ／ＭＥＫ／ＥＲＫ信号通路参与ＳＭ３０６诱导的ＭＣＦ７细胞调亡。２．化合物ＳＭ３０８诱导肝癌耐药细胞ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细胞自幢流

7、损伤和调亡的机制研巧。首先ＭＴＴ实验表明该化合物对ＨｅＧ２／ＡＤＭ细胞显示出较好的増ｐ殖抑制活性，并且饥饿处理可显著提高其对细胞的增殖抑制作用。采用ＭＤＣ染色观察酸性囊泡，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ检测自踐相关蛋白如ＬＣ３、Ｂｅｃｌｉｎ一１，Ａｔ５ＳＭ３０８处理后细胞出现了。ｇ的含量变化，结果表明大量自隆体进步采用ＬＣ３Ｔｕｒｎｏｖｅｒ实验对细胞自隨流进行评化并且Ｐ６２／ＳＱＳＴＭ１蛋白作为自隨选择性降解底物其水平增加，表明ＳＭ３０８抑制ＨｅｐＧ２／ＡＤＭ细胞自

8、嗤流。采用透射电镜观察细胞亚显微结构，发现大量包裹有未能降解内容物的单层膜结构即自駿溶酶体积累于细胞中－，通过ＤＱＢＳＡ实验检测发现ＳＭ３０８抑制了细胞溶酶体的降解活性。更重要的是，ＳＭ３０８处理细胞Ｉｈ后ＰＩ３ａ和－Ａｋｅｒ４７３ＰＢＫ／Ａｋ激酶Ｐ１１０ｐｔ（Ｓ）水平均明显上调，说明ｔ信号通路被活化。并且我们使用ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２或者Ａｋｔ的ｓｉＲＮＡ处理细－６２／Ｓ１胞时，ＳＭ３０８导致的ＬＣ３ＩＩ的累积量减少，同时ＰＱＳＴＭ蛋白作为自礎性降解底物其含