不同鸡mhc单倍型的判定及同种异型抗血清的制备

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1、分类号学号Ｍ＂２７的ＵＤＣ密级＾＾４叫大聲｜ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ｜硕壬学隹文业型）（专不同鸡ＭＨＣ单倍型的判定及同种异型抗血清的制备王洪志２２５００９指导教师姓名，扬州大学，江苏扬州，；常国斌教授申请学位级别：硕壬学科专业名称：农业推广（养殖）论文提交日期０１５年５月论文答辩２０１５年５月２２曰：２日期：２０１５学位授予单位：年６月３０曰：扬州大学学位授予日期答辩委员会主席：邦锡杰教授２０１５年５月本研究由国家高技术研究发展计划８６３计划（）Ｑ０１１ＡＡ１００３０５）、国家自

2、然科学基金（３１１７２１９９）和江苏省农业科技支撑（ＢＥ２０１３３９２）资助Ｉ不同鸡ＭＨＣ单倍型的判定及同种异型抗血清的制备中文摘要我国是养禽大国且养禽产业发展非常迅速一，而疾病是限制养殖业发展的个重要因素。长时间Ｗ来，养禽业控制疾病主要依赖疫苗免疫，由于ＭＤＶ等病毒的普遍存在及病毒。毒力的不断増强等许多原因，，使得免疫鸡群甚至是免疫过疫苗的鸡群仍时有感染因此研究者开始转向鸡的抗病育种研究，期望能在遗传素质上提高鸡只的抗病性。许多研究已经表明，ＭＨＣ基因的多态性在家禽中与多种传染病的抗性存在高度相关性，是家禽抗病育种研究中的优选标记基因。

3、在鸡上ＭＨＣ、，已发现某些单倍型与抗病性免疫应答及经济性状间具有相关性，但对其研究还远远落后于人类，分析出不同鸡种的血型单倍型关系并对那些具有抗性的鸡种进行选育，具有重要的经济意义。本研究Ｗ２６个中国地方鸡种和外，ＭＨＣ基因上ＬＥＩＯ巧８微卫星来鸡种为研究对象根据座位的序列信息，对这些鸡种进行ＭＨＣ单倍型的判定，并在新扬州鸡群体内制备了Ｂ２１和Ｂ１８两种同种免疫抗血清，并在不同鸡群中用血清学方法对抗血清进行了验证。ＭＨＣ单倍型％个鸡种１０首先，我们选取，，为了确定不同鸡种的每个鸡种按照个个一ＢＧ体混成个ＤＮＡ池的标准送入华大基因公司（Ｉ）对ＭＨＣ

4、基因进行目标捕获测序，找－、、、出不同鸡种ＭＨＣ基因序列上的差异，发现在说：方２公Ｍ４２、及ＪＶＭ：ｉ６＞Ｃ７化版巧７知＞试／２基因上外来鸡种与地方鸡种存在较大差异，送些基因可作为后抗病研究的候选基因。根据ＭＨＣ基因上ＬＥＩ０２％微卫星重复序列片段数目的不同Ｗ及围绕重复序列的侧翼序列的多态性，对不同鸡种进行ＭＨＣ单倍型的判定，并根据文献资料，对不同血型单倍型与疾病抗性的关系进行统计分析。结果表明：ＬＥＩ０２５８微卫星座位序列多态性丰富，不同鸡种在ＬＥＫ）２５８微卫星座位上也存在着位点差异性，２６个鸡种分为下不同单倍型：乌晉鸡为Ｂ１８单倍型；来航鸡为Ｂ

5、５单倍型：深阳鸡为Ｂ１０／Ｂ２４／Ｂ２６／Ｂ７６单倍型：广西黄鸡与白耳鸡为Ｂ７２／Ｂ７８单倍型；罗斯鸡、固始鸡、雪山草鸡、萧山鸡、隐性白羽鸡、鹿苑鸡、太湖鸡和绿壳蛋鸡都为Ｂ２１．１／ＢＱ／ＢＷ１单倍型；安卡鸡、大骨鸡、文昌鸡及青脚麻鸡为ＢＣ单倍型；斗鸡、红色原鸡、仙居鸡、狼山鸡、如草鸡、北京油鸡和ＡＡ鸡为ＢＣ／Ｂ２１．１化Ｑ化Ｗ１单倍型现了新的单倍型。由于ＭＨＣ血型单倍型与疾；藏鸡与茶花鸿出病抗性存在密切关系，根据文献报道及测得不同鸡种的ＭＨＣ单倍型：，结果显示乌骨鸡为Ｂ１８单倍型对ＳＥ显示为易感性；来航鸡为Ｂ５单倍型对ＭＤ、ＲＳＶ、ＡＬＶＷ及旧Ｄ显

6、示出易感性；罗斯鸡、固始鸡、雪山草鸡、萧山鸡、隐性白羽鸡、鹿苑鸡、太湖鸡、绿壳蛋、、、斗鸡、红色原鸡仙居鸡、狼山鸡如草鸡、北京油鸡和ＡＡ鸡都含Ｂ２１单倍型，ＩＩ对ＭＤ、ＡＬ队及旧Ｄ显示出较强的抗化这些鸡种对不同疾病显示出不同的抗性。这些结果表明我国地方鸡种中ＭＨＣ单倍型种类比较丰富，遗传多样性较高，运可能是地方鸡一种比外来鸡种及现代商业品种抗性强的主要原因之。由于血型是可Ｗ遗传的，通过红细胞凝集实验利用特异性抗血清可Ｗ快速鉴定出不同鸡种的血型，这种方法简便快捷，有广泛的使用价值。我们选定新扬州鸡对ＬＥＩ０２５８微卫星片段进行扩増并进行重测序分析，

7、巧出含有Ｂ２１和Ｂ１８单倍型的鸡只，并Ｗ它们的外周血红细胞作为免疫原，对其它单倍型鸡进行免疫，制备了同种异型抗血清，建立了微量血凝试验，对抗血清效价进行了测定并在新扬州鸡和罗斯鸡群体内用血清学方法进行了验证。结果表明：新扬州鸡群体内存在不同单倍型，同单倍型不同个体鸡的效价大致相同：，Ｂ２１抗血清血和Ｂ１８抗血清凝效价均为１４。利用血清学鉴定手段在新扬州鸡和罗斯鸡群体内检测两种抗血清效果，结果显示新扬州鸡群体内Ｂ２１单倍型个体比例较高，罗一斯鸡群体内Ｂ１８单倍型个体比例