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《鸡mhc_链基因的克隆和表达及其抗体制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、安徽农业大学学报,2006,33(1):51255JournalofAnhuiAgriculturalUniversity鸡MHCⅡβ链基因的克隆和表达及其抗体制备①113211徐志本,余为一,仲大莲,李槿年,周杰(11安徽农业大学动物科技学院,合肥230036;21中国科技大学生命科学学院,合肥230026)摘要:用自行设计的1对引物,通过RT2PCR从鸡脾细胞中分别克隆了鸡MHCⅡβ链基因片段,大小为798bp。核苷酸测序结果表明,与已登录的基因序列同源性为95%。将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX24T21,构建了pGEX24T212chMHCⅡβ。经诱导表达,获
2、得分子大小约为53000的融合蛋白,其中chMHCⅡβ链大小约27000。经亲和层析,获得纯化GST2β融合蛋白,进一步用此蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡MHCⅡβ链抗体。经过琼扩和ELISA检测,表明该融合蛋白具有良好的抗原性。关键词:鸡MHCⅡ;β链基因;克隆;原核表达中图分类号:S83112;S85214文献标识码:A文章编号:16722352X(2006)0120051205CloningandexpressionofthegenefragmentencodingchickenMHCⅡβchainanditsantibodypreparation11211XUZhi2ben,YUWe
3、i2yi,ZHONGDa2liang,LIJing2nian,ZHOUJie(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036;2.CollegeofLifeScience,ScienceandTechnologyUniversityofChina,Hefei230026)Abstract:ThegenefragmentofchickenMHCclassIIbetachainfromspleenlymphocyteswasclonedbyRT2PCRusingapairofprimer
4、s.Itwas798bpinlengthandshowed95%similaritytothepreviouslyidentifiedchick2enMHCⅡbetaatnucleotidelevel.ThefulllengthchickenMHCⅡbetachaincDNAwasclonedintopGEX24T21.Therecombinantplasmid,namelyPGEX24T2chMHCⅡβ,wastransformedintoEscherichiacoliBL21andGST2βfusionproteinwasinducedtoexpress.AMWofthefusionp
5、roteinwasabout53000asanalyzedbySDS2PAGE.Thepurifiedfusionproteinwasusedtoimmunizedmiceandthespecificantibodywasobserved,whichwasidentifiedfurtherinimmunodiffusionandELISA.Theresultsindicatedthatthisexpressedfusionproteinhadfavorableanti2genicity.Keywords:chickenMHCⅡ;geneofβchain;cloning;prokaryoti
6、cexpression[9]主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility跨膜糖蛋白,在细胞介导免疫和体液免疫中起重[10]complex,MHC)是一个高度多态性的基因群,与机体要作用,比如T细胞在对识别外源被呈递的抗原[1][11]抗病力和免疫应答相关。研究表明,鸡某些疾病时,需要MHCⅡ分子存在。在病毒感染的疾病[2]的抵抗性和易感性也与其有关,如新城疫、马立中,某些病毒蛋白通过干扰MHCII的功能,影响机[3][4][5][6][12]克氏病、淋巴白血病、禽霍乱、劳斯氏肉瘤体正常的免疫识别。它的缺陷可能引起自身免[7]等。鸡MHCII链分子存在免疫细胞表面、由
7、α链疫病的发生,因此它在免疫学上具有重要的研究价[8]和β链以非共价键相连组成的一组高度多态的值。近年来研究发现,MHC分子除了在免疫应答中①收稿日期:2005210206基金项目:国家自然科学基金(30270974)资助。作者简介:徐志本(1975-),男,硕士研究生;余为一(1952-),男,博士,教授,博导。3通讯作者(Correspondingauthor)E2mail:yuweiyi@sohu1com52安徽农
