salubrinal减轻大鼠脑死亡状态下肝损伤的分子机制研究

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1、学校代码10459学号或申请号201111440164密级公开博士学位论文Salubrinal减轻大鼠脑死亡状态下肝损伤的分子机制研究作者姓名：曹胜利导师姓名：张水军教授学科门类：医学专业名称：普通外科培养院系：第一临床学院完成时间：2015年3月AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorTheprotectiveeffectsofSalubrinalonratliverinjuryinducedbybraindeathBy:shenglicaoSuperv

2、isor:ShuijunzhangMedicine,GeneralSurgeryThefirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch6,2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者、日期、15年y月“曰学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及

3、相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：彳ov日期：年―月>日摘要Salubrinal减轻大鼠脑死亡状态下肝损伤的分子机制研究研究生：曹胜利导师：张水军郑

4、州大学第一附属医院郑州450052摘要肝脏移植是治疗终末期肝脏疾病最有效的治疗途径。制约肝脏移植发展的最主要因素是肝脏供体的短缺。脑死亡供体是肝脏移植的主要供体来源。脑死亡是指包括脑干功能在内的全脑功能不可逆和永久的丧失。脑死亡是一个复杂的病理生理过程，是一个直接影响器官形态和功能的动态过程。研究表明脑死亡来源的供体较活体来源的供体移植术后并发症多、生存率低。因此，脑死亡被认为是造成供体器官损伤的一个独立危险因素。细胞凋亡的增加是导致脑死亡供体肝脏损伤的主要因素。引起细胞凋亡的途径有三条，内质网应激途径引起凋亡是线粒体途径和外源性途径之外的

5、第三条凋亡途径。通常情况下，内质网通过未折叠蛋白反应保护由外界刺激对细胞的损伤，但是当应激时间延长或者应激强度增大，不能通过未折叠蛋白反应保护机制代偿，最终会通过激活内质网应激凋亡通路引起细胞凋亡。内质网类似激酶(PKR-likeendoplasmicreticulumkinase,PERK)是一种丝氨酸苏氨酸激酶，在内质网应激启动后，通过磷酸化真核生物的翻译起始因子2α（eukaryotictranslationinitiationfactor2α,eIF2α）,介导细胞的凋亡。Salubrinal可通过选择性诱导eIF2α磷酸化和抑制其

6、去磷酸化来对抗内质网应激（endoplasmicreticulumstress,ERs）诱导的细胞凋亡，并且其不保护与ERs无关的细胞凋亡刺激。研究表明Salubrinal能减轻细胞的凋亡。因此，研究应用内质网应激诱导凋亡抑制剂对脑死亡肝脏损伤的影响，有I摘要利于阐明脑死亡对肝脏损伤的机制，为脑死亡下器官功能的保护奠定理论基础和提供药物靶点。目的：探讨内质网应激抑制剂Salubrinal对大鼠脑死亡状态下肝损伤的影响及分子机制方法：本研究分为三个部分：第一部分：大鼠脑死亡模型制作方法的改进：在传统渐进式诱导脑死亡模型的基础上进行改良，采用缓

7、慢间歇颅内加压法，诱导脑死亡的发生。通过以下标准进行脑死亡的判定：深昏迷、脑干反射消失、自主呼吸停止及脑电图出现平直。在诱导脑死亡发生及维持脑死亡状态时实时监测颅内压、脑电图、心电图、平均动脉压、体温等的变化。第二部分：内质网应激介导脑死亡状态下肝损伤的机制研究：在改良的大鼠脑死亡模型的基础上，将大鼠随机分为假手术组及脑死亡组。通过免疫组织化学及蛋白质免疫印迹检测假手术组及脑死亡组大鼠肝脏中内质网应激分子标志物（Grp78和Xbp-1）及凋亡相关蛋白(Chop和Caspase-12)的变化。另外，利用原位细胞凋亡法检测肝细胞的凋亡及透射电镜

8、观察肝细胞的微观变化。通过荧光定量PCR检测内质网应激凋亡相关基因的mRNA表达变化。第三部分：Salubrinal对大鼠脑死亡状态下肝损伤的作用：将SD大鼠随机分为3组：脑死亡