papp-a均相化学发光检测方法的建立和在acs诊断中的初步应用

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1、分类号：R446.61学校代码：10062密级：学号：2011702299硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：PAPP-A均相化学发光检测方法的建立和在ACS诊断中的初步应用TITLEEstablishmentofHomogeneousChemiluminescentImmunoassayMethodofPAPP-AandPreliminaryApplicationintheACS（超敏PAPP-A均相发光免疫测定方法建立及初步应用基金资助项目:2013KY24)（高通量均相发光免疫分析仪与诊断试剂开发基金资助项目:2012AA02260）一级学科

2、：临床医学二级学科：临床检验诊断学论文作者：王瑞指导教师：李会强教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R446.61学校代码：10062密级：学号：2011702299学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：PAPP-A均相化学发光检测方法的建立和在ACS诊断中的初步应用TITLEEstablishmentofHomogeneousChemiluminescentImmunoassayMethodofPAPP-AandPreliminaryApplicationintheACS（超敏PAPP-A均相发

3、光免疫测定方法建立及初步应用基金资助项目:2013KY24)（高通量均相发光免疫分析仪与诊断试剂开发基金资助项目:2012AA02260）一级学科：临床医学二级学科：临床检验诊断学论文作者：王瑞指导教师：李会强教授导师组成员：常艳敏主任天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：201

4、5年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：2015年月日导师签名：日期：2015年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：新近研究发现PAPP-A是冠状动脉粥样斑块不稳定性的炎性生物标志物之一，血清PAPP-A的升高变化对急性冠脉综合征的早期诊断及

5、预后具有一定价值。与孕妇血清PAPP-A不同，非孕血清中的PAPP-A以低水平存在，而目前使用的PAPP-A检测方法灵敏度较低，不适用非孕血清的检测。本研究采用活性氧传递免疫分析技术方法，建立适合检测ACS患者血清超敏PAPP-A水平的定量分析体系,评价分析方法的各项性能指标。在此基础上对ACS患者标本分组检测，实验研究在急性冠状动脉综合征患者血清中，PAPP-A是否对ACS具有较好的预测作用，对此类疾病危险分层和预后评估的价值。方法：制备生物素化PAPP-A抗体和抗体包被的受体微球，以双抗体夹心法与血清中PAPP-A结合，以光激化学发光分析方法检测PAPP-A浓度。通过改

6、变加样模式、加样顺序，调整试剂比例和反应时间温度等方面，优化检测方法的反应条件。利用ELISACale软件建立四参数拟合方程的标准曲线，初步建立PAPP-A均相化学发光免疫检测方法。同时评价均相化学发光分析检测PAPP-A方法的灵敏度、精密度、准确性、稳定性等各项性能指标，初步推算正常人的参考范围。根据病程进展对急性冠脉综合征患者进行分组研究，比较各组ACS患者与对照组的PAPP-A水平有何差别，同时与其它ACS相关的指标进行分析，初步探讨PAPP-A与ACS之间的临床相关性。结果：确定PAPP-A检测方法：在96孔板中加入25ul生物素化抗体（1:2000），25ul受体

7、球（1:100），25ul样本，于37℃孵育30min，避光条件下加入175ul供体微球，于37℃孵育10min测定信号值。此PAPP-A检测方法灵敏度为0.55mU/L，回收率在95%-100%；线性、稳定性及特异性良好；重复性：批内变异系数（CV）小于10%，批间CV小于15%；选择血红蛋白、甘油三酯和胆红素三种常见干扰因素对此检测方法的干扰较小。采用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）与本实验建立的均相化学发光法检测30例（10例心梗患者，20例孕妇）血清标本，二者进行相关分2析（r=0.988，P<0.05）