基于毛细管电泳的适配子检测应用方法的建立及其在肝癌诊断中的初步应用

《基于毛细管电泳的适配子检测应用方法的建立及其在肝癌诊断中的初步应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：大媚乙签字日期：矿哆年5月弓p日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授

2、权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：走敝导师签名(手写)：多渺签字日期：≯，歹年夕月j，日签字日期：勿j年3-月3≈日摘要目的：核酸适配子是通过指数富集配体系统进化技术从单链寡核苷酸文库中筛选出的能与靶分子高

3、特异性、高亲和力结合的核酸配体。在前期工作中我们筛选出一批针对肝癌血清特异的核酸适配子。毛细管电泳是一种微量分析技术，具有高效、自动化程度高、快速等优点。本研究旨在建立一利，基二尹毛细管电泳技术的核酸适配子与血清结合程度的分析方法，为适配子在肝癌诊断中的应用提供一种简便有效的新方法。方法：(1)核酸适配子来源及合成：选用本课题组前期j[作中以肝癌混合皿清为靶标筛选出的诊断价值较好的适配子AP—HCS。9—90，由上海Sangon公司合成，并在5’端标记FAM。(2)血清标本收集：收集南昌大学第一附属医院2010～2012年问确诊的原发性肝癌患

4、者及参加健康体检且各项检查均『F常的诉常人血清。并制成肝癌混合血清和iF．常混合血清。(3)毛细管电泳检测适配子的重复性观察：将适配子溶液直接进行毛细管电泳检测，重复检测，观察实验的重复性；将适配子溶液与肝癌混合血清孵育后进行毛约U管电泳分析，霞复检测，观察实验的重复性。(4)毛细管电泳检测适配子的影响因素分析：将梯度浓度的适配子分别与肝癌混合血清和『F常混合血清孵育后进行毛细管电泳，以确定合适的适配子用量；将合适用量的适配子与血清在不同温度下孵育后进行毛细管电泳，以确定合适的孵育温度；将合适用量的适配子与血清在合适温度下孵育后以不同电压进行

5、毛细管电泳，以确定合适的分离电眶；将合适的适配子用量与血清在合适温度下孵育后以不同的进样时长进样并以合适的电胍进行毛细管电泳，以确定合适的进样时

6、’白J。最后，在上述合适的条件下，以不同的运行缓冲液进行毛细管电泳，确定合适的缓冲液。(5)毛细管电泳条件正交实验：在初步优化条件基础上，选取影响程度较大的4个参数，分别设置4个水平，设计『F交表，将适配子分别与肝癌混合血清、诈常混合血清孵育，重复i次实验，确定最佳条件。(6)适配子的诊断价值分析：以最佳的条件进行临床标本检测，对峰面积比值进行受试者：f作特征(ROC)曲线，观察曲线卜．面积(AUC

7、)大小，计算适配子诊断肝癌的敏感度、特异度和准确度等诊断效能指标，以评价其对肝癌的诊断价值。摘要结果：(1)毛细管电泳技术检测的重复性：适配子溶液的进行了10个复管的毛细管电泳分析，变异系数为4．48％；适配子溶液与肝癌混合血清孵育后进行毛细管电泳，lO个复管的变异系数为4．93％。(2)毛细管电泳检测适院子的影响因素分析：合适的适配子用量为0．9pmol。合适的孵育温度为25℃，合适的分离电泳为25KV，合适的进样时fBj为5s，合适的缓冲液为磷酸赫缓冲液。(3)正交实验：肝癌混合血清的C峰面积与B峰面积之比明显大于『F常混合血清。以该比值

8、为指标进行统计分析，确定的最佳实验条件为：缓冲液pH8、电压15kV、孵育时问20min、适配子用量O．5pmol。(4)对肝癌的诊断价值：以上述优化条件检测了111例肝癌血清标本和6l例正常血清标本。肝癌组的C峰面积及C届峰面积之比值与正常对照组的差异均具有统计学意义(P=o．000)。，前者的AUC为0．930；诊断肝癌敏感度、特异度和准确度分别为94．6％，8013％、‘90．7％，后者的AUC为0．925，诊断肝癌的敏感度、特异度和准确度分别为。91．O％、85．2％和89,0％。结论：本研究对毛细管电泳技术分析肝癌血清适配子与血清结

9、合程度的影响因素进行了研究，在单因素分析的基础上进行正交试验优化实验条件，成功建立起基于毛细管电泳的适配子检测应用方法，并在肝癌诊断中具有良好的价值。关键词：核酸适