epo光激化学发光定量检测方法的建立

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1、·1202·中国免疫学杂志2013年第29卷doi：10．3969／j．issn．2000-484X．2023．22．028EPO光激化学发光定量检测方法的建立①陈凯②吴丹②聂庆东③相平④任杰④李会强(天津医科大学医学检验学院免疫学教研室，天津300140)中国图书分类号R392-33文献标识码A文章编号1000-484x(2013)11—1202-06[摘要]目的：建立双抗体夹心模式光激化学发光免疫(LiCA)技术定量检测血清促红细胞生成素(EPO)的方法，并对方法进行方法学评估。方法：采用棋盘格滴定法，用针对EPO抗原的一个单克隆抗体及两个多克隆抗体，分

2、别包被发光微粒，及进行生物素化，两两配对筛选出最佳双抗体组合，进而确定最佳反应浓度，建立光激化学发光检测EPO的方法，建立标准曲线，评价该方法。研究中采用SPSS19．0软件和EL2SACalc进行统计分析。结果：筛选到一组最适抗体，分别与发光微粒和生物素进行连接，成功建立了EPO定量检测的双抗体夹心模式LiCA方法。该法检测的敏感性为0．09ng／ml，在0．09～30rig／ml范围内线性良好。批内变异系数和批问变异系数分别为2．93％和3．86％，EPO浓度高达30rig／ml时无Hook效应。51例EPO增高及51例健康体检者EPO的测定结果与放射免

3、疫法检测EPO比较具有良好的相关性(r=0．957)，建立的参考范围为0．766．80ng／ml。结论：成功建立了双抗体夹心模式的光激化学发光定量检测EPO的方法。该检测方法均具有敏感性高、免洗板、线性范围宽、背景荧光低、快速简便等特点。在EPO检测中具有极好的应用前景，有助于EPO诊断试剂盒的研制。[关键词]促红细胞生成素；光激化学发光；方法学评价Theestablishmentoflightinitiatedchemiluminescenceassayforthequantitativedeterminationofplasmaerythr0p0ieti

4、nCHENKai，WUDan，NIEQing—Dong，XIANGP，RENfie，LIHui—Qiang．DepartmentofImmunology，TianjinMedicalUniversity。Tianjin300140。China[Abstract]Objective：Toestablishadoubleantibodysandwichmodequantitativelightinitiatedchemiluminescenceimmunoas—say(LiCA)detectofserumerythropoietin(EPO)，andassess

5、thismethod．Methods：Usingthecheckerboardtitration，withamono—clonalantibodyandtwopolyclonalantibodytoEPOcoatedwithlightemittingparticlesandbeenbiotinylatedseparately．Filteroutthebestdouble—antibodycombinationpair，andthendeterminetheoptimumconcentrationofthereaction，toestablishalighti

6、nitiatedchemiluminescencedetectionmethodofEPOwithmakingastandardcurveforevaluation．SPSS19．0softwareandELISACalcstatisti—calanalysisbeenusedinthestudy．Results：Usingthebestdouble—antibodycombinationpairwhichbeenfilteredouttoconbinewiththelight—emittingparticlesandbiotinylated，toestab

7、lishedthedoubleantibodysandwichmodeLiCAoftheEPOquantitativedetectionmethodsuccessfully，with0．09ng／mlsensitivity，goodlinearin0．09—30rig／mlrange．Thecoeficientofvariationandthedaysofbatch—to·batchvariationcoeficientswere2．93％and3．86％，thereisnoHookeffectofEPOconcentrationsupto30rig／m1．

8、Therewasagoodcorrelation(，