bmcpv编码的microrna鉴定及其rdrp基因的dsrna干扰研究

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1、学校代码：10289分类号：S882.1密级：公开学号：111310003江苏科技大学博士学位论文BmCPV编码的microRNA鉴定及其RDRP基因的dsRNA干扰研究研究生姓名潘中华导师姓名郭锡杰申请学位类别农学博士学位授予单位江苏科技大学学科专业特种经济动物饲养论文提交日期2015年月日研究方向家蚕分子病理学论文答辩日期2015年6月7日答辩委员会主席评阅人2015年5月3日资助项目：国家重点基础研究计划“973”项目（No.2012CB114600）江苏省研究生创新基金CXZZ13-07分类号：S882.1密级：公开学号：111310003农学博士学位论文BmCPV编码的micr

2、oRNA鉴定及其RDRP基因的dsRNA干扰研究学生姓名潘中华指导教师郭锡杰江苏科技大学二O一五年五月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofDoctorofAgricultureIdentificationofBmCPVencodedmicroRNAsanddsRNAinterferenceonBmCPVRDRPgeneSubmittedbyPanZhonghuaSupervisedbyDr.GuoXijieJiangsuUniversityofScienceandTechnologyMay,2015江苏科

3、技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫

4、描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日VI江苏科技大学农学博士学位论文摘要家蚕质型多角体病毒(BombyxmoriCytoplasmicpolyhedrosisvirus，BmCPV)病，是家蚕的一种肠道型病毒病，在养蚕生产上具有较大的危害性，病原是一种具包涵体的多角体病毒。研究家蚕质型多角体病毒编码的microRNA（miRNA）和RNA干涉（RNAInterfering，RNAi），一方面从miRNA途径探明病毒与宿主的免疫调控关系，从而找到miRNAs调控病毒的靶点；另一方

5、面探索RNAi干扰病毒复制的可行性，对于家蚕病毒病的分子治疗乃至抗病品种的育成具有重要的理论和实际意义。本研究预测了BmCPV编码的miRNAs，对其中的两条进行了生物信息学分析、鉴定和表达特征检测，初步探索了对病毒本身基因表达的影响；同时研究了双链短RNA（简称dsRNA）对BmCPV-RDRP基因的干扰作用，构建了表达dsRNA的转基因载体。通过本文研究，为进一步探索miRNAs与家蚕基因组互作的关系，miRNAs影响宿主的基因的表达，miRNAs与BmCPV病毒各分节基因相互作用的细致研究等提供重要的参考价值，同时也为培育抗BmCPV家蚕品种提供了技术依据。现将研究汇报如下。1.B

6、mCPV能够编码miRNAs。对感染BmCPV的家蚕中肠组织提取总小RNA，通过深度测序建立了小RNA文库，预测获得BmCPV编码的miRNAs。对其中的两条miRNAs进行生物信息学分析、验证和表达特征检测。表明两条miRNA分别为BmCPV基因组RNA第三片段编码的miR-3（478～497bp）和第五片段编码的miR-5（2481~2500bp），大小均为20bp；在线分析绘制了其二级结构和3-D结构；Stem-loopRT-qPCR和Northernblot两种方法验证，确认了两条miRNAs的存在；表达特征检测进一步表明，miR-3表达量相对较多而miR-5表达较少，家蚕感染B

7、mCPV5h后能检测到病毒编码的miRNAs，24h后表达量呈上升趋势。研究结果表明BmCPV能够编码miRNA，为进一步深入研究BmCPV编码的miRNAs及其功能奠定了基础。2.BmCPV编码的miRNAs对病毒本身基因表达具有调控作用。家蚕感染病毒后体腔注射过量miR和Inhibition-miR，RT-qPCR检测病毒基因表达，结果显示，过量miR能够显著促进病毒部分基因表达。3.dsRNA对BmCPV-RDRP基因的干扰作