sars病毒rdrp基因的rna干扰的研究

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1、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯在读期间发表和待发表的论文⋯声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯图形目录第一章图1．1RdRp基因的组装示意图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12图1．2pcDNA3．1(+)质粒的结构图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13图1．3RdRp基因的组装结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19图1．4peDNA-RdRp质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20图1．5peDNA-RdRp质粒的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20图1．6组装的

2、RdRp基因的序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21图1．7SARS病毒序列系统进化分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23图1．8核苷酸序列突变位置示意图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25图1．9RdRp基因组装流程图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30图1．10退火过程中形成的两种分子⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l镰二章图2．1pEGFP—CI质粒的结构图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44图2．2plRESneo质粒的结构图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45图2．3重

3、组质粒的结构图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯56图2．4pcDNA-G和pcDNA-R的PCR和酶切分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59图2．5pcDNA-GR和pcDNA-RG的PCR和酶切分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60图2．6pEGFP-CRl和pEGFP．CR2的PCR和酶切分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l图2．7peDNA-GIR和pcDNA—RIG的PCR和酶切分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯62图2．8不同转染细胞制备的RNA样品⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64图2．9转染细胞中外源基因转录功能的RT-PCR分析

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64图2．10重组质粒转染VeroE6细胞后EGFt'基因的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6689O墙侈侈加●第三章图3．1质粒pEGFP，C1的部分单一酶切位点示意图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯88图3．2DNA和sF的量及其相互比例与转染效率的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯88图3．3转染时细胞的汇合度对转染效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯89图3．4D悄A-sF复合物与细胞共孵育的时间对转染效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90图3．5不同方法制备的DNA对转染效率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90图3．6Veto．EGFP细

5、胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92图3．7Veto．RdRp细胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93图3．8Vero—GIR细胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93图3．9293．GIR细胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯94图3．10以细胞基因组DNA为模板进行的PCR检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯95第四章图4．1siRNA表达盒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114图4．2sLRNA表达盒的模板DNA的结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯117图

6、4．3siRNA表达盒的模板DNA的设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯118图4．4siRNA的20％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯125图4．5Cy3标记的siRNA的20％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯126图4．6cy3标记的siRNA的转染效率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12'图4．7RNAi的VcroE6细胞图片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯128图4．8RNAi后EGFP的相对表达量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯129图4．9EGFP基因的扩增曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131图4．10EGFP基因的PCR标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯j⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．131图4．11EGFP基因的溶解曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131图4．12RdRp基因的扩增曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132图4．13RdRp基因的PCR标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132周4．14RdRp基因的溶解曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132阁4．1513-actin基因的扩增曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133图4．16p-aetin基因的PCR

8、标准曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133图4．1713-actin基因的溶解曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133图4．t8定量PCR产物的电泳检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1