欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:27561112
大小:109.50 KB
页数:9页
时间:2018-12-03
《rna干扰的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、RNA干扰的研究摘要:RNA干扰足指巾dsRNA介导的特异靶序列mRNA基冈沉默的现象,白1998年发现以來,在分子生物学研究方而己取得秉大进展。特别足在哺乳动物中的应用研究,构建稳定表达URNA载体,有效筛选siRNA靶序列方而取得了突破,而且在难因功能研究,遗传病的难因治疗,胞内抗病毒免疫,机体水平应用研究方面也杏了重人进展。关键词:RNAT扰;基因沉默;靶序列;引物;发卡结构TheresearchofRNAinterferenceHenanZhang(07BiologicalClass,MedicalCollegeofSun-yats
2、enuniversity)Abstract:RNAinterferencemeansthephenomenonofspecificmRNAgenesilencecausedbytheinterpositionofdsRNA.Sincediscoveredin1998,RNAihasgotgreatprogressonBiologyresearch.Peoplehavegotbreakthroughespeciallyontheapplianceresearchofmammals,thebuiltofthestablesiRNAcarrier
3、andtheefficientselectionofsiRNAtargetsequence.Andpeoplealsogotgreatprogressongenefunctionresearch,genetherapyofheredopathia,endocellanti-viralimmunityandapplianceresearchofbodylevel.Keywords:RNAinterference;genesilence;targetsequence;prime;hairpinRNAT扰(RNAi)真正被确定是Fire于1998
4、年在秀丽线虫中发现了转录后的基因沉默[1],并且引起了分子生物学家和遗传学家等的很大兴趣。RNA十扰广泛存4:于各种生物中包括:从真菌到枬物,从无脊椎动物到哺乳类动物等几乎所有真核生物。并很快从对线虫的研究扩展到了对锥虫、果蝇、脊椎动物以及医学肿瘤[2]、微生物遗传病基因治疗、基因功能研究[5]等多个领域。1.RNA干扰的发现历史:最初在1990年,Jorgensen等[6]在研究怎样增多矮牵牛花的颜色时,就观察到一种当时无法解释的现象:希望通过导入紫色色素合成酶基因增加色素基因拷贝,从而得到紫色加深的矮牵牛花;仴结果确是,一些矮牵卞花的
5、紫色不但没有加深,反倒使开出的花呈部分或全部的白色。进一步的研究说明,这些导入的基因非但没得到表达,并且使矮牵中花自身的基因表达受到了抑制。作者当吋称之为共抑制(cosuppression)o到了1994年,Cogoni[7]等发现:向链孢霉菌中转入albinol(al-1)或albino3(al-3)基因后,内源性al-1或al-3基因表达水乎人人降低。当时将这种真苘屮的基因表达抑制现象叫做消除作川(quelling)o1995年Guo等[8]在研究秀丽线虫胚胎的第一次卵裂时发现,给它注射par-1基因的反义KNA可以阻断par-1的转录
6、和翻译,但是对照组中的正义RNA也得ill了样的结果。1998年Fire等[9]用RNA聚合酶在体外转录出了与秀丽线虫发竹等相关基因的正、反以RNA,并且纯化之后导入秀丽线虫,发现导入的RNA可以抑制基因的表达,并且dsRNA比ssRNA效果更好,从此将这种现象命名为RNA干扰(RNAi)。并JI发现,dsRNA经过秀丽线虫肠道注射时,所产生的RXAi讨以4:细胞间传递并传至子代。2.RNA干扰的基本原理RNA干扰(RNAi)指发生在动植物屮由dsRNA指异的mRNA序列特异性降解的现象,它分为启始阶段和效应阶段两个阶段。对于哺乳动物的细胞
7、,启始阶段中细胞内RNasdlldicer从dsRXA链两端进行切割,产生19-23个核昔酸的dsRNA片段,即小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),其3’端含有2—3个核苷酸突出端,5’端磷酸化。效应阶段为:siKNA进入RNA诱导的沉寂复合物(RISC),并且RISC复合物是蛋白质-RNA效应子核酸酶g合体。siRXA进人后,由于位置构象原因而被解链成正义链和反义链,由反义链引异RISC和与之互补的靶RNA杂交,一只与靶RNA杂交RTSC上的核酸酶以则一定的闽隔,在被识别的2个核昔酸序列的中部进行切割,在两
8、端规律性地产牛.21个核苷酸的RNA片段[1°]。RNAi属于进化上非常保守的适应性应答机制,它能介导细胞对内源寄生性核酸和外源病原体核酸产生抗性,调节蛋白编码基因的表达。RNA
此文档下载收益归作者所有