阴道毛滴虫病毒rdrp基因的克隆与分析

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1、万方数据42中国人兽共患病学报ChineseJournalofZoonoses文章编号：1002—2694(2008)01—0042—03阴道毛滴虫病毒RDRP基因的克隆与分析*赵月平1’2，张西臣1，李建华1，尹继刚1，宫鹏涛1摘要：目的对阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因的克隆，以便探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫总核酸为模板，根据所克隆的阴道毛滴虫病毒部分序列和GenBank中发表的阴道毛滴虫病毒TVv-Tl序列设计一对引物，经RT．PCR得到与预计大小一致的PCR特异性产物，将其克隆到pMD-18T载体后测序，并与GenBank中核苷酸序

2、列进行同源性搜索与分析。结果目的基因片段长度为2271bp，与阴道毛滴虫病毒T1株(U08999)的同源性最高为85．2％．结论国内首次成功克隆出阴道毛滴虫病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因序列。关键词：阴道毛滴虫病毒；RDRP；克隆；分析中图分类号：R382．21文献标识码：ACloningandsequenceanalysisoftheRNA-dependentRNApolymerase(RDRP)geneinTrichomonasvaginalisvirusZHAOYue—ping，ZHANGXi—chen，LIJian-hua，YINji—gan

3、g，GONGPeng-tao(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，JilinUniversity，Changchun130062，China)ABSTRACT：TocloneandanalyzetheRNA-dependentRNApolymerase(RDRP)geneinTrichomonasvaginalisvirusinor-dertoinvestigateitsfunction．apairofprimerswasdesignedaccordingtOtheclonedpartialsequenceand

4、thepublishedse-quencesofTvaginalisvirusinGenBankandthetotalnucleicacidofTvaginaliswasextractedandusedastemplatefortheamplificationoftheviralcapsidgenomebyusingRT-PCRassay,ThespecificPCRproductwasclonedtovectorpMD-18T-se—quencedandthencomparedwiththenucleotidesequencesavailableinGenBan

5、ktOanalyzetheirhomologies．Itwasdemonstra-tedthatthelengthofthetargetgenefragmentwas2271bpsandthehomologywiththatoftheT1stain(U08999)inGenBankwasratherhigh(82．5％)．ItseemsthatthenucleotidesequenceoftheRNA-dependentRNApolymerasegeneinTvaginalisviruswasfirstsuccessfullyisolated．KEYWORDS：T

6、richomonasvaginalisvirus；RDRP，cloning；sequencing阴道毛滴虫病毒是专性寄生于阴道毛滴虫细胞内的病毒，病毒的存在可影响虫体的致病力。从临床分离到的虫株中，大约有一半携带病毒。阴道毛滴虫病毒基因组序列和基因组大小也呈现多样性和多态性，形象地称阴道毛滴虫是多种病毒同时存在的贮存库n七3。病毒基因组均具有编码RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)的ORF，本研究是在阴道毛滴虫病毒鉴定的基础上，对病毒基因组中编码RNA依赖的RNA聚合酶基因进行了克隆，为进一步研究该基因的结构和功能奠定了基础。1材料与方法1．1阴道毛滴虫虫株系本室

7、从吉林大学第一临床医学院妇科门诊滴虫性阴道炎患者阴道分泌物中分离，经肝浸汤培养基于37℃无菌培养。1．2试剂胰蛋白胨、L-半胱氨酸盐、氯化钠、麦芽糖均为北京奥博星生物公司产品，新生胎牛血清为哈尔滨江海生物公司的产品，其它成分均为国产分析纯；AMV反转录酶、Taq酶、pMDl8-T载体、RnaseA为大连宝生物工程公司(TaKaRa)产品，DH5a、由本室保存。DNA片段回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自北京鼎国生物技术发展中心，DEPC购自北京同正生物技术公司。基因组DNA纯化试剂盒购自上海生工生物工程公司。1．3阴道毛滴虫总核酸的提取取6×109个虫体，参照基因组D

8、NA纯化试