文蛤（meretrix meretrix）壳色的鉴定及其相关基因和microrna研究

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1、浙江万里学院硕士专业学位论文题目：文蛤(Meretrixmeretrix)壳色的鉴定及其相关基因和microRNA研究Title：IdentificationofshellcolorandtherelatedgeneandmicroRNAresearchofMeretrixmeretrix研究生姓名：詹艳玲校内导师：林志华研究员校外导师：柴雪良高级工程师专业学位类别：工程硕士专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期2015年12月31日中图分类号：Q7单位代码：10876学号：20

2、13881014密级：公开浙江万里学院硕士专业学位论文题目：文蛤(Meretrixmeretrix)壳色的鉴定及其相关基因和microRNA研究Title：IdentificationofshellcolorandtherelatedgeneandmicroRNAresearchofMeretrixmeretrix研究生姓名：詹艳玲校内导师：林志华研究员校外导师：柴雪良高级工程师专业学位类别：工程硕士专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期2015年12月31日文蛤(Meretri

3、xmeretrix)壳色的鉴定及其相关基因和microRNA研究论文作者签名:指导教师签名:答辩委员会主席：教授委员1：教授委员2：高级工程师委员3：高级经济师委员4：副教授答辩日期：2015年12月31日浙江万里学院硕士专业学位论文摘要摘要文蛤(Meretrix.meretrix)是我国沿海广泛分布的埋栖型双壳贝类，也是重要的养殖贝类。在自然界中，许多海洋贝类的壳表显现出绚丽多彩的色泽和复杂精美的花纹图案，这些贝类丰富的壳色花纹，过去仅被看作是受环境影响产生的不同分泌物，而未引起遗传学家和育种工作

4、者的重视。近年来，大量的研究结果证实，许多贝类的壳色能够稳定地遗传给后代，即壳色性状主要受基因控制；在育种应用方面，壳色作为一个可见的遗传标记，不仅与贝类的生态和行为有关，而且与其生长、存活、抗病、抗逆等诸多表型性状显著相关，培育壳色艳丽的文蛤新品系对文蛤养殖业具有重要的意义。本研究以4个文蛤品系（白壳、红壳、暗纹和细纹）为材料，利用原子吸收光谱法和显微共聚焦拉曼光谱法对文蛤壳表色素进行扫描，初步鉴定其成分；从文蛤转录组文库中筛选出类胡萝卜丝吸收转运过程中的关键酶--硬脂酰辅酶A去饱和酶(Stear

5、oyl-CoAdesaturase，SCD)的EST序列，利用RACE技术获得SCD基因的cDNA全长，并利用qRT-PCR技术对SCD基因在4种壳色文蛤（白壳、红壳、暗纹和细纹）的不同组织中、不同壳色文蛤外套膜、不同发育时期的表达量进行分析，试图探究类胡萝卜素在不同壳色文蛤外套膜中的沉积规律，为文蛤呈色机理的研究提供依据；此外同等条件下对红壳文蛤和白壳文蛤进行养殖，并通过Illumina深度测序技术对文蛤外套膜组织进行microRNA两个文库进行了测序。主要研究结果如下：1、利用原子吸收光谱法测得

6、不同壳色文蛤外套膜组织中Zn、Fe、Cu、Mg、Ca、Mn元素的含量，探索该金属元素与壳色之间是否存在相关性，结果表明，该6种金属元素在红壳和白壳文蛤外套膜组织中并无显著性差异。采用共聚焦激光拉曼光谱法对各种壳色、未经漂白处理的文蛤进行了激光拉曼光谱研究,初步发现不同壳色的文蛤均存在特征相近的有机物拉曼谱峰。随着颜色由浅至深,有机物拉曼谱峰强度呈有规律地变化。四种壳色文蛤均由4个有机物引起的拉曼峰，分别为1010-1020cm-1、1120-1140cm-1、1290-1300cm-1、1530-1

7、540cm-1。其中弱的拉曼峰1010-1020cm-1是由于颜料分子中的侧向甲基的平面内摆动引起的；1290-1300cm-1峰与分子中的侧向甲基有关，它的存在只是表明分子链存在小的畸变，不影响判断贝壳中所含物质的种类；图中显示的1125cm-1、1511cm-1是两个最强的拉曼峰，这两个拉曼峰的相对强度（I1125/I1511）与贝壳表面颜色密切相关，这两个拉曼峰是由于典型的全反式共轭双键的类胡萝卜素引起的。以上事实均可证明不同壳色文蛤壳表均含有类胡萝卜素类物质。Ⅰ浙江万里学院硕士专业学位论文摘

8、要2、克隆了文蛤硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(Stearoyl-CoAdesaturase，SCD)，并获得其cDNA全长，该cDNA全长2404bp，开放阅读框918bp，共编码390个氨基酸，预测其分子量约为34.95kD，理论等电点为8.79。对MmSCD基因机构进行预测，结果表明，该蛋白为疏水性蛋白，并没有明显的信号肽结构；对氨基酸序列进行同源性比对显示，文蛤与加州海兔(Aplysiacalifornica,EKC23483.1)和虾夷扇贝(Mizuhopecte