1，25oh2d_3对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

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1、1,25(OH)2D3对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响Theimpactof1,25(OH)2D3onbleomycininducingpulmonaryfibrosisinmice作者姓名：孔培培专业名称：内科学指导教师：米东辉教授学位类别：医学硕士答辩日期：年月日指导小组成员姓名职称科室米东辉教授呼吸内科谭平教授呼吸内科王静副教授呼吸内科陈志营副教授呼吸内科赵建军副教授呼吸内科闫明洲教授心血管内科赵平教授消化内科前言间质性肺疾病（interstitiallungdisease，ILD）为临床少见病，发病率大概为10-25/100000人口，但65岁以后

2、发病率会明显的增加。近年来其发病率呈上升趋势。间质性肺疾病的具体诊断依赖于临床表现、肺功能测试、高分辨率计算机断层扫描和肺活检检查，但临床征象与高分辨率计算机断层扫描表现不一致时，建议行肺活检确诊病理类型。ILD可分为特发性间质性肺炎（idiopathicinterstitialpneumonia，IIP）、肉芽肿性间质性肺炎和其他形式的间质性肺疾病。根据美国胸科协会和欧洲呼吸协会共同发布的2013年修订的结果IIP又可进一步分为主要的IIP（特发性肺纤维化、呼吸性支气管炎性间质性肺病、脱屑性间质性肺炎、急性间质性肺炎、特发性非特异性间质性肺炎）、罕见的I

3、IP（特发性胸膜肺实质弹力纤维增生症、特发性淋巴细胞性间质性肺炎）和不能分类的IIP。目前国内外研究学者对该病的认识仍存在许多盲点，对该病的病因、确切发病机制及病理过程未形成统一并且清晰的认识，从而使临床治疗面临各种挑战，仍处在摸索阶段，这些也促使了间质性肺疾病日益成为研究热点。1,25(OH)2D3是维生素D（VD）在体内通过代谢反应后的活性产物，是体内最为活跃的VD形式，其主要作用是调节钙磷代谢。随着科技的进步，人们认识到1,25-二羟维生素D3还具有抗纤维化的作用，目前已有大量体外实验证实1,25(OH)2D3有抗肝脏及肾脏纤维化作用。纤维化为间质性

4、肺疾病的主要病理过程，但目前关于1,25(OH)2D3的抗肺纤维化作用的实验研究较少。I本实验中，我们将小鼠的气管切开，然后将博来霉素一次性注入小鼠气管内，制造小鼠肺的纤维化模型，再给予小鼠胃内灌入1,25(OH)2D3，在术后的7、14、28天每组各处死1／3小鼠，观测鼠肺的病理学改变并测算肺内羟脯氨酸的量，进而研究治疗组中1,25(OH)2D3对肺纤维化的干预作用，检测不同时间点各组小鼠肺组织Smad3、Smad7的表达，探讨1,25(OH)2D3干预肺纤维化的可能机制，为肺纤维的临床药物治疗提供新选择。II中文摘要1,25(OH)2D3对博来霉素诱导

5、小鼠肺纤维化的影响目的：本实验中，我们将小鼠的气管切开，然后将博来霉素一次性注入小鼠气管内，制造小鼠肺的纤维化模型，再给予小鼠胃内灌入1,25(OH)2D3；在术后的7、14、28天每组各处死1／3小鼠，观测鼠肺的病理学改变并测算肺内羟脯氨酸的量，进而研究治疗组中1,25(OH)2D3对肺纤维化的干预作用，检测不同时间点各组小鼠肺组织Smad3、Smad7的表达，探讨1,25(OH)2D3干预肺纤维化的可能机制。为肺纤维化的临床药物治疗提供新选择。方法：雄性C57BL／6小鼠（SPF级）100只，10只机动，其余90只随机分为3组，每组30只：向治疗组小鼠

6、（A组）和模型组小鼠（B组）的气管内注入5mg／kg的博来霉素；向对照组小鼠（C组）气管内注射等体积的生理盐水。自造模第2天起，每天向治疗组胃内灌入0.5g／kg加入了蓖麻油稀释的1,25(OH)2D3，向模型组和对照组胃内灌入等体积的蓖麻油＋生理盐水的混合液。在术后的7、14、28天每组各处死1／3小鼠。取小鼠的右肺上叶使用10％中性甲醛固定，以作石蜡切片和免疫组织化学染色使用，余下的肺组织使用液氮速冻以作羟脯氨酸含量测定使用。采用双盲原则，在光镜下对经过HE和Masson染色的肺组织切片进行观察，然后按照统一的标准确III定肺泡炎及肺纤维化的分级及评分

7、。选用试剂盒测定羟脯氨酸含量，免疫组化染色法测定Smad3、Smad7的表达量，具体操作按照说明书进行。通过秩和检验比较对照组、模型组和治疗组小鼠肺泡炎和肺纤维化的特点；采用方差分析比较三组羟脯氨酸含量、Smad3及Smad7的表达量差别。选用SPSS21.0统计软件，对实验数据进行统计学处理，以P＜0.05表示差异有统计学意义。结果：在模型建立后，模型组小鼠出现活动减少、呼吸急促，治疗组小鼠也出现上述症状，但给予1,25(OH)2D3灌胃后与模型组相比小鼠症状好转，相对活跃，呼吸困难症状轻；治疗组小鼠7天时肺组织可见轻度水肿，14天时可见水肿充血、出血点

8、，28天时肺组织体积变小，介于对照组及模型组之间，质地变硬，表面见