antiflammin1抑制博来霉素诱导肺纤维化及其机制地研究 (1)

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1、万方数据

2、1IIIIIIIIIIIUlIIIUUl学位论文原创性声明Y⋯268783≯本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：±!l生日期：圣堑笙_年鱼月笠日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保

3、留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版：本人允许本学位论文被查阅和借阅：学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：导师签名日期：呈堑仝年互月丛日日期：星旦!生年互月盟曰万方数据Antiflammin．1抑制博来霉素诱导的肺纤维化及其机制研究摘要肺纤维化是严重危害健康的呼吸系统常见并发症，是各种不同病因的肺间质疾病的最后共同结局。由于大部分肺部疾病的最终转归都伴有不同程度的肺纤维化，因此肺纤维化

4、不仅是肺部疾病转归的结果，还是导致原有疾病进一步恶化的主要原因。目前肺纤维化的临床治疗以给予皮质类固醇类和其他免疫抑制剂药物为主，但是研究发现其只对部分肺纤维化患者有效，对特发性肺纤维化患者疗效较差。肺纤维化的发病率和死亡率近年呈逐渐上升态势，对人类健康危害极大。因此，寻找新的治疗策略迫在眉睫。Antiflammin．1(AF．1)是与子宫珠蛋白(uteroglobin，UG)第三个alpha螺旋中的保守序列高度同源的一段寡肽，由于最初发现在体内具有较强的抗炎作用而得名。AF．1由九肽组成，对应于UG分子中的第39-47位氨基酸(MQMKKVLD

5、S)。研究证实，AF．1具有抗炎、抑制细胞趋化及粘附等多种与UG相似的生物活性。与大分子天然蛋白UG相比较，AF．1的分子量更小，免疫原性更低，因此具有潜在的应用前景。以往的研究集中在对AF．1的抗炎作用和机制的探索上，鉴于UG在肺纤维化发生发展中的重要作用和本课题组前期关于AF一1抑制转化生长因子一betal(transforminggrowthfactor-betal，TGF—B1)诱导的NIH3T3增殖的作用，本课题首先在整体实验部分探索AF．1是否具有抑制博来霉素(bleomycin，BLM)诱导的小鼠急性肺炎症反应和抗肺纤维化的作用。我

6、们在前期实验中发现，UG的活性片段AF．1也能够特异性地结合UG受体，并且通过UG受体的介导，AF一1能够特异性的调节小鼠成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen．activatedproteinkinase，MAPK)信号途径。由于UG受体同样表达于肺泡上皮细胞上，那么，既然AF．1能够通过结合成纤维细胞膜上的UG受体而抑制TGF一131促增殖的作用。那么是否AF．1同样能通过上皮细胞膜上的UG受体而发挥某种生物学功能?本课题进一步在细胞实验部分尝试观察：①AF．11是否能够抑制TGF．131诱导的上皮细胞间质转化本课题由国家自然科学基金(

7、#30400190、#30670770、#30870916、#81100057)，湖南省自然科学基金(撑09JJ3057)及湖南省高校创新平台开放基金项目(撑11K076)资助。II万方数据(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)的作用?②如果能，是否同样依赖于UG受体的介导?ⅡI万方数据第一章AF．1抑制博来霉素诱导的急性肺损伤方法：将60只实验小鼠随机分为3组，A组为生理盐水组，B组为BLM组，C组为BLM-t-AF一1组。单次给予小鼠气管内注射BLM(5mg／kg)以造成小鼠急性肺损伤，每日腹腔注射AF一

8、1(2mg／kg)，于BLM给药7天后收集样本，检测肺湿干重比值，HE染色法观察小鼠肺组织病理形态学变化，ELISA法检测肺组织匀浆TGF．p1、白介素．1beta(interleukin一1D，IL．1D)及肿瘤坏死因子．alpha(tumornecrosisfactor-alpha，TNF．Cc)的浓度，肺组织匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性的检测，肺泡灌洗液中细胞分类计数、蛋白含量及乳酸脱氢酶(1acticdehydrogenase，LDH)活性的检测。结果：(1)气管内注射BLM(5mg／kg)后第7天，BL

9、M组肺湿干重比值、肺系数及MPO活性较正常对照组显著增加(氏0．05)，给予AF．1(2mg&g)处理后，BLM+AF—l组肺湿干重比值