yb-1抑制三氧化二砷诱导的肿瘤细胞自噬及其机制的研究

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1、江苏大学硕士学位论文YB--1抑制三氧化二砷诱导的肿瘤细胞自噬及其机制的研究姓名：龙璐璐申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：许文林20120607江苏大学硕士学位论文摘要目的：1通过转染SiRNA干扰人YB．1基因的质粒(SiYB．1)和携带人YB．1基因的腺病毒表达载体pAdIEasy／YB．1(AdYB．1)，探讨YB．1与小剂量三氧化二砷(As203)诱导的乳腺癌MCF．7细胞及胃癌BGC．823细胞自噬的关系。2．从自噬相关基因Beclin1和Bcl．2调控细胞自噬的机制着手在基因和蛋白水平初步

2、探讨YB．1调控自噬的机制。方法：1．Western．blot方法检测脂质体转染SiRNA干扰YB．1和腺病毒转染pAdlEasy／YB．1过表达YB．1的MCF．7细胞和BGC．823细胞中YB．1蛋白表达的变化。2．4I．tM／LAs203作用于转染SiYB．1和AdYB．1的MCF．7细胞及BGC．823细胞，运用Western．blot的方法检测各转染组细胞中自噬标记蛋白LC3．II和p62的表达，MDC自噬特异性染料荧光染色观察自噬泡的聚集综合评价YB．1对As203诱导的肿瘤细胞自噬的影响。3．

3、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western．blot的方法检测自噬相关基因Beclin1和Bcl．2在MCF．7细胞及BGC．823细胞各转染组中的mRNA水平和蛋白水平表达情况。4．转染AdYB．1的MCF．7细胞及BGC．823细胞，用Bcl一2的抑制剂HAl4．1预处理后再用As203诱导，Western．blot方法检测各组中蛋白LC3一II、p62和Beclinl的表达，MDC染色观察自噬泡的聚集。结果：1．转染SiYB．1幂[1AdYB—l的MCF．7细胞及BGC．823细胞，YB．1

4、抑制三氧化二砷诱导的肿瘤细胞自噬及其机制的研究经Western-blot方法检测，与无意干扰组(HK)和空病毒组(AdGFP)相比，两细胞的SiYB．1组YB．1蛋白表达均明显降低(P<0．05)，AdYB．1组YB．1蛋白表达均明显升高(P

5、比蓝色荧光的强度明显减弱。相反，转染了SiⅦ．1的肿瘤细胞与对照组细胞相比，由As203诱导的细胞自噬水平进一步增强，自噬标记蛋白检测示SiYB．1组促进了As203诱导的细胞内LC3．II蛋白的转化，p62蛋白的降解也明显增加，MDC染色可见自噬泡荧光强度增强，荧光颗粒明显增多。3．BGC．823细胞和MCF一7细胞各转染组经49M／L的As203诱导后，qRT-PCR检测显示，与转染对照(AdGFP)组相比，AdYB．1组Bcl．2基因相对表达水平增高(P<0．05)；而干扰YB．1表达后，SiYB．1

6、组Bcl．2基因相对表达水平较其转染对照(HK)组明显降低(P

7、的抑制齐WJHAl4．1预处理4h后再用As203诱导，Western．blot检测显示，AdYB．1组Beclin1蛋白表达降低，P62蛋白降解减少，LC3．II蛋白减少，在加入HAl4．1组Beclin1蛋白恢复表达，P62降解增加，LC3一II升高。提示在Bcl．2的抑N帮JHAl4．1预处理后，As203诱导的自噬不能因转染AdYB．1而被抑制。江苏大学硕士学位论文结论：1．在BGC．823细胞和MCF一7细胞中成功转染SiYB．1和AdYB·l改变YB—l的表达。2．YB．1能够抑制As203诱导

8、的BGC一823细胞和MCF．7细胞的自噬水平。3．YB．1可能通过上调Bcl-2、抑制Beclinl，实现对As203诱导的肿瘤细胞自噬的抑制作用，为YB．1参与调控肿瘤细胞的自噬提出了新的机制。关键词：YB．1；Bcl．2；Beclin1；自噬；三氧化二砷YB．1抑制三氧化二砷诱导的肿瘤细胞自噬及其机制的研究ABSTRACTObjectives：1．ToinvestigatetheexpressionofY-