盐皮质激素受体在博来霉素诱导肺纤维化中的作用

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：溯趁，＼导师签章：日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负

2、。研究生签名：朔，趔11导师签章：矽，易年；月留日目录；{-文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1蜒文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文盐皮质激素受体在博来霉素诱导肺纤维化中的作用前。言⋯”⋯⋯．．⋯⋯“⋯”⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一⋯”一”“一“”“”“．．““·9刖舌⋯”⋯⋯“⋯⋯“⋯”⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一⋯”一”“一“”“”““““‘y材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯····⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“一··29附图⋯⋯⋯⋯··⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33附表⋯⋯⋯⋯⋯

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4、diopathicPulmonaryFibrosis，IPF)是一种原因不明的进展性、致死性的纤维化性间质性肺炎。目前，IPF的发病机制尚不明确，缺乏有效治疗手段。IPF患者诊断后的平均生存时间仅为2．5—3．5年川。近些年来，涌现出大量关于IPF发病机制及治疗方法的研究。盐皮质激素受体(Mineralocorticoidreceptor,MR)是一种典型的胞核甾体类激素受体，醛固酮是其选择性配体。MR在肾脏、肺脏、心、血管、脑以及免疫系统等部位均有表达【21。近些年研究表明，MR参与了巨噬细胞的活化表型调节【3】，MR与纤维化过程有着密切的联系【41。但是MR是否参与了肺纤维化的发病过程及

5、其作用机制尚不明确。本研究拟使用博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型，首先，检NMR在肺纤维化过程中mRNA和蛋白的表达情况，探讨其在肺纤维化进展过程中的作用；其次，通过使用MR抑制剂(螺内酯)阻断MR，观察阻断MR后，肺纤维化程度的变化；最后，通过检测0【．平滑肌肌动蛋白(Q．smoothmuscleactin，0【．SMA)、单核细胞趋化蛋白1(Monocytechemoattractantprotein．1．MCP—1)、转化生长因子-p(Transforminggrowthfactor-13，TGF．p)的表达水平，探讨MR在肺纤维化发病过程中发挥其病生理作用的分子机制。此外，采用RNA干

6、扰技术，构建稳定干扰MR基因的小鼠巨噬细胞RAW264．7，观察对其增殖和凋亡等生物学特性的影响。方法：1)126只6．8周龄C57BL／6小鼠，随机分为对照组(Contr01)、博来霉素组(Bleo)和螺内酯干预组(Bleo+Spiro)，每组42只。气管内‘次性滴注博来霉素(2．5mg／Kg)溶液建立实验性小鼠肺纤维化模型，对嗽j,,幺----．Lf_{L采取气管内滴注同等体积生理盐水。螺内酯干预组按螺内酯20mg／Kg经灌胃给药。于模型建立完成后第12h、ld、2d、3d、7d、14d、28d处死小鼠，取出肺脏，用于进一步分析。使用生理盐水对每组一半的小鼠肺脏进行常规灌洗。灌洗后的肺组

7、织，经4％多聚甲醛溶液固定，常规切片(581TI)，采用H．E．染色、Masson染色的方法进行组织学分析。采用0【．SMA免疫荧光染色分析小鼠肺脏中0【．SMA表达水平。未经灌洗的肺组织用于中文摘要mRNA分析和Western．Blot检测，采用Real-timePCR法检测各组肺组织中Coil(Collagen1)、C013(Collagen3)、TGF-p、MCP一1及MRmRNA的表达水平。采用Wes