鹅卵泡闭锁过程中氧化应激诱导颗粒细胞自噬的研究

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1、分类号糾１３密级公开ＵＤＣ６３６全曰制硕±专＾学位硏究生学位论文鷄卵泡闭锁过程中氧化应激诱导颗粒细胞自倦的研究作者姓名：类亚萍指导教师：赵阿勇副教授专业学位名称：农业推广硕±领域名称；养殖研究方向：繁殖育种￣农业与食品科学学院、所在学院；动物科技学院（筹）论文提交日期：２０巧年１２月２１日浙江农林大学２０１５年日１２月２１ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterStudyonfollic

2、ulargranulosacellautophagyinducedbyoxidativestressingooseCandidate:YapingLouAdviser:AyongZhao,AssociateProfessorSpeciality:AnimalbreedingDateofSubmission:December21,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,Zhejiangprovince,P.R.ChinaDecember21,2015独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是受“鹅就卵巢期机能退化相

3、关miRNA鉴定及其作用机理解析”的科研项目资助，在指导老师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文

4、的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密,本学位论文属于不保密。（请在方框内打“√”）摘要摘要浙东白鹅是中国肉鹅中著名的优良品种，具有生长速度快、肉质鲜美等特点，然而其就巢性强，产蛋量低，使品种的发展收到严重阻碍。对就巢期的母鹅的卵巢进行观察，发现其中卵泡均发生不同程度的闭锁，众多研究表明，禽类卵泡中颗粒细胞凋亡是导致其卵泡闭锁的主要原因。哺乳动物中的研究显示，细胞凋亡与细胞自噬密切相关，且作用机制复杂。鉴于此，本试验试图从自噬的角度研究卵泡闭锁的相关机制。试验通过透射电镜

5、、免疫组化等方法，对正常生长卵泡和闭锁卵泡中自噬体进行定位与观察，并采用Westernblot、荧光定量PCR等技术，对自噬体标记蛋白LC3的表达量进行检测，判断卵泡闭锁是否与细胞自噬相关。同时，通过多个生化指标的测定，检测氧化应激是否通过诱导卵泡细胞的自噬促进卵泡闭锁。此外，在动物试验结果的基础上，通过培养原代鹅卵泡颗粒细胞，建立氧化应激模型，以进一步在细胞水平进行验证。在鹅卵泡颗粒细胞氧化模型的基础上，分别加入Rapamycin和3-methyladenine(3-MA)，以检测卵巢颗粒细胞中mTOR信号通路和Beclin-1信号

6、通路，探究氧化应激诱导鹅卵泡颗粒细胞自噬的作用机制。研究结果表明：与生长卵泡相比，闭锁卵泡颗粒细胞中自噬水平升高(P<0.05)，氧化应激水平升高(P<0.05)。通过H2O2诱导颗粒细胞建立氧化模型，检测发现自噬水平显著升高(P<0.05)。对氧化应激模型进行3-MA或Rapamycin共处理，发现Rapamycin共处理组LC3-Ⅱ蛋白表达量显著升高(P<0.05)，自噬体数量显著增多(P<0.05)，而3-MA对颗粒细胞自噬水平无影响。研究结论：本研究证明了鹅就巢期卵泡闭锁与颗粒细胞自噬相关，明确了氧化应激引起的内环境变化是诱导

7、颗粒细胞自噬的重要因素。且在氧化条件下，mTOR信号通路是诱导颗粒细胞发生自噬的主要途径。关键字：自噬，鹅颗粒细胞，浙东白鹅，氧化应激，闭锁卵泡，就巢性IABSTRACTABSTRACTZhedongwhitegooseisanimprovedvarietyamongtheChinesegoose.Butitseggproductionislowbecauseofitsbroodiness.That’swhathinderedthedevelopmentofthisvariety.Byobservingtheovaryoffemale

8、gooseinbroodyperiod,wefoundatresiafolliclesoccurredindifferentstages.Numerousstudiesshowthattheapoptosisofgran