白藜芦醇对ox-LDL诱导卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用研究

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1、学校代码10459学号或申请号201622444023993密级公开专业硕士学位论文白藜芦醇对ox-LDL诱导卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用研究作者姓名：李薇薇导师姓名：郭艺红教授专业名称：妇产科学（生殖医学）培养院系：第一附属医院完成时间：2018年5月AdissertationsubmittedToZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterResearchofResveratrolontheRegulationofAutophagyandApoptosisinducedbyox-LDLinGranulosaCell

2、sofOvarianByWeiweiLiSupervisor:Pro.YihongGuoMajor:ObstetricsandGynecology(ReproductionMedcine)TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2018白藜芦醇对ox-LDL诱导卵巢颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用研究研究生李薇薇导师郭艺红教授郑州大学第一附属医院生殖医学中心中国郑州450052摘要背景多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)是导致女性不孕的常见生殖内分泌疾病，其卵泡

3、发育呈混乱无序的状态，多个窦卵泡停滞在主导卵泡选择前，无优势卵泡形成，不能正常排卵。研究表明卵泡的发育与颗粒细胞的功能状态密切相关，自噬与凋亡的发生均可调节颗粒细胞增殖与死亡的平衡状态，因此研究颗粒细胞的自噬与凋亡对于探索PCOS的病理生理机制至关重要。PCOS患者脂质代谢紊乱发生率明显高于正常人，脂质代谢紊乱不仅导致心血管疾病发生风险增加，同样会威胁女性生育力。氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)的产生作为脂质代谢的重要环节，与心血管疾病、糖尿病等多种代谢性疾病的发生发展密切相关。PCOS患者血清

4、与卵泡液ox-LDL水平明显升高。研究发现ox-LDL通过影响颗粒细胞相应受体LOX-1、TLR4表达，诱导颗粒细胞发生修复性自噬或自噬性死亡。白藜芦醇（resveratrol，RES）作为常见的抗氧化剂，能够减少窦状卵泡，增加次级卵泡，减少颗粒细胞死亡，促进其增殖，降低氧化应激水平。此外，RES可降低雄激素水平，增加胰岛素敏感性，诸多研究证实RES对PCOS的治疗具有一定的临床价值。那么RES对颗粒细胞自噬与凋亡有无影响呢，目前未见报道。本研究旨在探究RES对ox-LDL诱导的颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用，为深入研究PCOS患者排卵功能障碍的病理生理机制

5、奠定基础。目的探索白藜芦醇对ox-LDL诱导颗粒细胞自噬的调控作用及分子机制，研究白藜芦醇对ox-LDL诱导颗粒细胞凋亡的调控作用。材料和方法于郑大一附院生殖中心筛选符合纳入条件的患者28例，收集卵泡液，将提取的颗粒细胞在体外进行原代培养48h。将颗粒细胞分为4组，实验组1加入150μg/mlox-LDL，实验组2加入30μMRES，实验组3加入100μg/mlox-LDL+30μMRES，对照组不予处理，添加后36h检测LOX-1，自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I及凋亡标志物cleavedcaspase3表达，并对ROS、p-AKT、AK

6、T、p-PI3K、PI3K、p-Ser2448-mTOR、mTOR进行检测。通过蛋白质印迹法(Westernblot)检测LOX-1、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I、p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K、p-Ser2448-mTOR、mTOR表达，通过RT-qPCR检测LOX-1mRNA表达，通过ROS试剂盒检测颗粒细胞内ROS含量。探究RES对ox-LDL诱导颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用研究。结果1.ox-LDL处理组自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I以及凋亡标志物cleavedcaspase3表达均高于对照组（Beclin1

7、：P＜0.001，LC3-Ⅱ/LC3-I：P＜0.001，cleavedcaspase3：P＜0.001），ox-LDL+RES处理组自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I以及凋亡标志物cleavedcaspase3表达均低于ox-LDL处理组（Beclin1：P＜0.01，LC3-Ⅱ/LC3-I：P＜0.001，cleavedcaspase3：P＜0.001）。2.ox-LDL处理组LOX-1mRNA表达均高于对照组（P＜0.001），ox-LDL+RES处理组LOX-1mRNA均低于ox-LDL处理组（P＜0.001）。ox-LDL处理组LO

8、X-1表达均高于对照组（P＜0.001），ox-LDL+RES处理