通心络改善缺氧引起内皮细胞损伤的作用机制

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122606HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位通心络改善缺氧引起内皮细胞损伤的作用机制研究生：宋莉莉导师：郑斌教授专业：生物化学与分子生物学二级学院：基础医学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研宄所获得的研宄成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为

2、单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研宄生签名：求诜和导师签二级学院领导盖章对年}月4日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章:Wi"年》月3丨曰目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要…………………

3、……………………………………………5英文缩写………………………………………………………………9研究论文通心络改善缺氧引起内皮细胞损伤的作用机制前言………………………………………………………………10材料与方法………………………………………………………11结果………………………………………………………………19附图………………………………………………………………23讨论………………………………………………………………33结论………………………………………………………………35参考文献……………………

4、……………………………………35综述KLF4和KLF5的翻译后修饰的研究进展………………………38致谢……………………………………………………………………49个人简历………………………………………………………………50中文摘要通心络改善缺氧引起内皮细胞损伤的作用机制摘要目的：缺氧是常见的导致血管内皮受损的因素之一。大多数心血管疾病发生都是由于血管内皮损伤后引起的，因此积极控制对血管内皮细胞有损伤作用的因素对预防心血管疾病的发生有着重要的意义。MicroRNA-155（miR-155）是一个典型的多

5、功能的microRNA，在心血管疾病发生发展过程中发挥着关键的作用。最近有研究提示，miR-155对心血管疾病相关细胞---内皮细胞、单核巨噬细胞以及血管平滑肌细胞的功能均有不同程度的影响。KLF4和KLF5是KLF家族中重要的成员，它们都是含有锌指样结构的转录因子，在调控细胞增殖、分化以及组织形成等方面都发挥着重要的作用。SUMO化(sumoylation)是一种类泛素化的翻译后修饰方式。SUMO化可引起蛋白质表面特征的改变并调控蛋白质间的相互作用，从而影响靶蛋白定位、活性以及稳定性等多方面的性

6、质。通心络（Tongxinluo,TXL）是一种中药复方提取物，在临床上主要用于治疗心脑血管疾病。本研究旨在为阐明通心络对血管内皮细胞紧密连接蛋白的保护作用及其分子机制以及为其扩大临床应用范围提供实验依据。方法：将C57BL/6J小鼠随机分为对照组,缺氧组和缺氧+通心络预孵-/-育组。miR-155敲除（miR-155）小鼠随机分为缺氧组和缺氧+通心络预孵育组。缺氧组和缺氧+通心络预孵育组置于自制低压氧舱内，每天6小时，共28天。通心络预孵育组按7.5mg/10g体重每天给予通心络超微粉混悬液灌胃

7、。28天后取小鼠主动脉进行免疫荧光染色。培养人心脏微血管内皮细胞，分组给予通心络和缺氧刺激，Westernbolt方法分别检测紧密连接蛋白，HIF-1a，UBC9，KLF4以及KLF5的表达。用GFP和miR-155腺病毒刺激人心脏微血管内皮细胞并用靶向miR-155的siRNA敲低miR-155转染人心脏微血管内皮细胞，用Westernbolt方法检测在过表达miR-155或敲低miR-155时紧密连接蛋白的表达；用qRT-PCR方法检测对照组、缺氧组及缺氧+通心络预孵育组小鼠主动脉内miR-1

8、55的表达；免疫共沉淀（COIP）的方法检测缺氧、通心络刺激条件下KLF4和KLF51中文摘要与UBC9的相互作用以及KLF4和KLF5的苏素化水平。通过双荧光素酶报告基因检测系统分析KLF4及KLF5的苏素化对miR-155启动子活性的影响。结果：1通心络可以上调缺氧抑制的紧密连接蛋白的表达免疫荧光结果显示，慢性缺氧组主动脉内紧密连接蛋白阳性细胞数少于正常对照组，与缺氧组相比，缺氧+通心络预孵育组小鼠主动脉内紧密连接蛋白阳性细胞数明显增加。Westernbolt结果与其相一致。提