野蔷薇苷抑制ea.hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制

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1、河北医科大学硕士学位论文野蔷薇苷抑制EA.hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制姓名：龚海英申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：李灵芝201010中文摘要野蔷薇苷抑制EA．hy926内皮细胞缺氧所致损伤的作用及机制摘要目的：研究野蔷薇苷(Rosamultin)对EA．hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用，并探讨其可能机制。方法：1、人脐静脉内皮细胞株(EA．hy926)用含10％FBS的高糖DMEM培养液置二氧化碳培养箱中培养，待细胞生长成单层后备用。2、通过MTT法及LDH检测确定EA．hy926内皮细胞的缺氧时间，建立缺氧损伤模型。3、通过MTT法及LDH检测确定野蔷薇苷高、

2、中、低剂量组药物浓度，细胞随机分为正常对照组、缺氧损伤模型组、野蔷薇苷1×10。10mol／1、1×10—1mol／1、1×10。12mol／1干预组(缺氧同时加入野蔷薇苷)，红景天苷组(1×10～mol／1)。通过MTT法检测细胞代谢活力，检测LDH含量观察不同剂量野蔷薇苷对EA．hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用。4、采用HE染色观察野蔷薇苷对缺氧损伤EA．hy926细胞形态的影响。5、检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量，研究野蔷薇苷对缺氧所致内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用。6、检测细胞外一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。

3、7、通过RT-PCR、WesternBlot以及ELISA技术检测各实验组HIF．1、VEGFmRNA及其蛋白表达的差异。结果：1、倒置相差显微镜下观察，正常培养EA．hy926内皮细胞，呈上皮样贴壁生长，胞体饱满，折光良好，细胞成多角形或扁平短梭形，细胞核为圆形，椭圆形，可见核仁1～2个，呈鹅卵石样铺满底层。2、缺氧损伤模型建立：EA．hy926细胞缺氧损伤0--一2h，随缺氧时间韵延长，细胞活性明显降低，LDH外漏增加，曲线较陡。2--一，6h间，随缺氧时间的延长，细胞活性下降幅度变小，LDH外漏量曲线趋于平缓，故确定2h为模型缺氧时间。3、LDH活性检测及MTT法确定野蔷薇苷高、中

4、、低剂量组药物浓度分别为1×10一umol／1、l×10。1mold、1×10qzmol／1。4、野蔷薇苷对EA．hy926内皮细胞缺氧损伤的保护作用：(1)MTT检测显示：与正常对照组比较，缺氧损伤模型组细胞代谢活力下降中文摘要(尸

5、著升高(尸

6、与模型组比较NO含量、NOS活性均升高(尸

7、促进NO的合成与释放、促进VEGF基因高表达有关。关键词：野蔷薇苷；EA．hy926内皮细胞；缺氧损伤；氧自由基，内皮功能英文摘要EffectsandMechanismsofRosamuitininhibitingHypoxiaInjurytoEA．hy926EndothelialCellsABSTRACTobjeetive：TostudytheeffectsandmechanismsofRosamultininhibitinghy